提高细胞上清液中甲状旁腺激素水平对甲状旁腺细胞培养及分泌功能有优化作用

摘要

背景:端粒酶反转录酶是一种重要的调控细胞分化增殖的酶,其具有多种生物活性.研究表明,经过hTERT基因修饰后可能有利于提高甲状旁腺细胞增殖能力的存活能力和功能,能够起到对甲状旁腺细胞体外培养的优化作用.目的:用负载hTERT目的基因的反转录病毒PLXSN转染大鼠甲状旁腺细胞,观察细胞生物学特性及细胞分泌功能变化,以探讨甲状旁腺细胞培养更为优化的方法.方法:28只雄性Wistar大鼠,由北京维通利华动物实验技术有限公司提供,经天津医科大学动物实验伦理委员会批准(批准号为2017-0652).大鼠麻醉后切取甲状旁腺并通过病理学确认,用胶原酶 Ⅱ 消化获得甲状旁腺细胞,并经过Western blot检测钙敏感性受体、甲状旁腺激素和神经胶质细胞缺失转录因子(GCM-2)进行鉴定.将鉴定后细胞分为正常的甲状旁腺细胞组、空病毒组和hTERT转染组.hTERT转染后3d,通过RT-PCR和Western blot检测各组细胞中hTERT基因和蛋白相对表达;应用细胞生长曲线和CCK-8法观察细胞生长情况;采用流式细胞术测定细胞周期分布;使用酶联免疫吸附测定法检测细胞的上清液中甲状旁腺激素的浓度变化.结果与结论:①Western blot检测结果显示甲状旁腺细胞的特异性标志物钙敏感性受体、甲状旁腺激素及神经胶质细胞缺失转录因子(GCM-2)均呈现阳性结果,表明培养细胞为甲状旁腺细胞;②hTERT转染组中hTERT基因和蛋白的相对表达显著高于甲状旁腺细胞组和空病毒组(P<0.05);③hTERT转染组中细胞的生长速度明显地增快,细胞周期G0/G1期减少,而S期细胞数增多(P<0.05),培养细胞上清液中甲状旁腺激素水平显著升高(P<0.05);④结果说明,携带hTERT基因的反转录病毒PLXSN转染大鼠甲状旁腺细胞可促进大鼠甲状旁腺细胞增殖;明显地提高细胞上清液中甲状旁腺激素水平,对甲状旁腺细胞培养及分泌功能有优化作用.