胰酶分次消化及无血清角化细胞培养基培养甲床上皮细胞的体外实验

摘要

目的:探讨甲床上皮细胞体外培养及传代的方法.方法:实验于2004-10/2005-04在吉林大学第一医院中心实验室完成.①标本消毒后,切取甲床并剪碎.②2.5g/L胰蛋白酶+3g/L乙二胺四乙酸1:1混合液,37℃下消化重复3次,获得细胞悬液.③离心两次,清洗细胞,加入无血清角化细胞培养液制成细胞悬液,计数后接种于25 mm培养瓶中.④37℃,体积分数为0.05的CO2、饱和湿度的培养箱内培养,每2天换液1次.⑤至单层细胞铺满近培养瓶底的80%以上时进行传代.⑥第3代细胞检测项目:倒置显微镜下观察细胞生长情况并摄片;细胞计数,绘制生长曲线;鼠抗人角蛋白17抗体做免疫细胞化学.结果:①细胞生长情况:倒置显微镜观察接种后的细胞12 h后,大部分贴壁,11d左右时细胞生长密度可达瓶底的70%～80%,呈铺路石样排列.②免疫细胞化学鉴定结果:培养的细胞70%以上特异性角蛋白17抗体染色阳性.③生长曲线和群体倍增时间:接种后一两天细胞数减少,自第3天起细胞数迅速增多,至9～12 d达高峰.对数期细胞群体倍增时间为4.46 d.结论:利用酶消化法成功培养出人甲床上皮细胞,所得细胞纯度高并能传代培养,为深入研究甲床细胞的病理生理及分子生物学奠定了基础.