piggyBac转座子调节pP-ggyBac-Rb质粒的构建

摘要

背景：外源性Rb基因的导入是抑制视网膜母细胞瘤细胞增殖的有效途径，piggyBac转座子介导的外源基因表达载体高效安全，在基因治疗方面具有广阔的应用前景。目的：探讨piggyBac转座子介导的外源性Rb基因的转染效率及其对视网膜母细胞瘤细胞的抑制作用。方法：采用RT-PCR技术扩增Rb基因编码区Rb cDNA，定向插入到载体pPiggyBac，获得PiggyBac调节的Rb表达质粒pPiggyBac-Rb；通过单独转染或合并pPiggyBac-helper转染人视网膜母细胞瘤细胞SO-RB50。结果与结论：考马斯亮蓝染色证明piggyBac转座子系统的转染效率最高，荧光定量PCR以及免疫荧光实验证明其介导的目的基因Rb与宿主SO-RB50细胞基因组整合效率最高且可在细胞中长期稳定表达，MTT实验证明经其所介导的外源性Rb基因表达对细胞活性影响最为显著。结果提示piggyBac转座子有可能成为视网膜母细胞瘤基因治疗的安全有效载体。