沉默膜联蛋白A1基因影响兔骨髓间充质干细胞的增殖及成骨分化能力

摘要

背景：膜联蛋白A1蛋白参与细胞的增殖和分化的调控。激素性股骨头坏死与骨髓间充质干细胞增殖和分化能力的改变相关。目的：观察沉默膜联蛋白A1基因对兔骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化能力的影响。方法：将新西兰大白兔的骨髓间充质干细胞分离培养后分为RNA干扰组，用携带针对膜联蛋白A1基因的短发夹RNA慢病毒载体LV-shANXA1感染骨髓间充质干细胞下调膜联蛋白A1基因的表达；阴性对照组，用携带无义基因序列的慢病毒载体LV-shANXA1-NC感染骨髓间充质干细胞；空白对照组，不加任何干预措施。结果与结论：纯化后的骨髓间充质干细胞CD44和CD105表达阳性率分别为97.2%和95.8%，而CD45阳性率为2.5%。经嘌呤霉素筛选后，感染复数为50时，LV-shANXA1对骨髓间充质干细胞感染效率为80%；感染复数为100时，感染效率为95%。实时 PCR 和Western blot检测显示感染复数为50时，LV-shANXA1对膜联蛋白A1基因的沉默效率效率可达72.4%以上。膜联蛋白A1表达下调后，骨髓间充质干细胞出现明显生长抑制，在随后成骨分化诱导后，细胞的碱性磷酸酶染色阳性率和碱性磷酸酶活性明显降低，且茜素红染色呈阴性反应。表明沉默膜联蛋白A1基因降低骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化能力，这可能是激素性股骨头坏死发病机制之一。