真核表达载体pcDNA3-ICOSIg的构建及表达

摘要

背景：人可诱导共刺激分子0cos）是迄今发现的重要共刺激分子家族成员，可促进激活T细胞的增殖和分泌、调节Th1／Th2细胞的极化、增强依赖T细胞的B细胞功能，阻断ICOS共刺激信号会导致T细胞的克隆失活或克隆无反应，从而诱导肿瘤对机体的免疫逃逸。目的：构建表达ICOSIg的质粒，观察其在小鼠体内的表达。方法：克隆编码ICOS的胞外片段，将其与编码小鼠免疫球蛋白IgG恒定片段（Ig）的基因融合，构建ICOSIg融合基因及其分泌型真核表达载体pcDNA3-ICOSIg，酶切鉴定重组子，测序，利用阳性脂质体载体包被pcDNA3-ICOSlg转染小鼠右侧大腿肌肉组织，Westernblot法检测血清ICOSIg水平。结果与结论：经测序鉴定证实pcDNA3．ICOSIg质粒目的基因片断与Genbank上公布的ICOS序列完全一致，说明质粒构建成功。脂质体载体包被pcDNA3-ICOSIg转染小鼠7d，在小鼠血清中检测到ICOSIg的阳性表达，说明pcDNA3．ICOSlg能够在小鼠肌细胞内表达。证实利用基因合成和重组技术可成功构建真核表达载体pcDNA3-ICOSIg。f201