二烯丙基三硫化物对人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的作用

摘要

目的 探讨二烯丙基三硫化物（DATS）对TNF-α诱导的人RA-成纤维样滑膜细胞（FLS）增殖以及炎症因子、MMPs和血管内皮生长因子（VEGF）分泌的影响。方法 体外培养RA-FLS,采用不同浓度DATS处理细胞,通过CCK-8法测定细胞增殖的活性,加用TNF-α刺激后,通过实时荧光定量（q）-PCR、ELISA检测IL-1β、MMP-1、VEGF的mRNA和蛋白的表达水平,采用单因素方差分析比较多组定量资料,采用LSD-t法比较组间均数。结果 分离出的RA-FLS中CD90、CD29表达的阳性率＆90%。经100 μmol/L、200 μmol/L、300 μmol/L DATS处理,细胞增殖活力分别为[（98.92±0.40）%、（95.91±0.32）%、（94.05±0.24）%],与正常对照组比较增殖活性均下降,加入200 μmol/L、300 μmol/L DATS的实验组差异有统计学意义（t=4.46,P＆0.05；t=7.98,P＆0.05）。加用TNF-α刺激后,与实验对照组相比,加入100 μmol/L DATS实验A组中的IL-6 mRNA相对表达量升高[（1.14±0.04）倍,t=5.74,P＆0.05],但蛋白变化差异无统计学意义,MMP-1、VEGF蛋白及mRNA变化差异无统计学意义。加入200 μmol/L DATS实验B组中IL-6、MMP-1、VEGF蛋白水平分别为[（108.0±4.7）ng/L,t=-63.79,P＆0.05；（26.0±1.0）ng/L,t=-9.68,P＆0.05；（57.9±0.7）,t=-34.59,P＆0.05]、mRNA较实验对照组的相对表达量分别为[（0.42±0.06）倍,t=-23.47,P＆0.05；（0.14±0.03）倍,t=-36.59,P＆0.05；（0.36±0.09）倍,t=-13.1,P＆0.05]；加入300 μmol/L DATS实验C组中IL-6、MMP-1、VEGF蛋白水平[（24.2±2.3）ng/L,t=-88.69,P＆0.05；（22.7±1.0）ng/L,t=-14.13,P＆0.05；（34.5±1.7）,t=-48.45,P＆0.05],mRNA较实验组对照组的相对表达量为[（0.041±0.027）倍,t=-38.48,P＆0.05；（0.027±0.027）倍,t=-41.22,P＆0.05；（0.131±0.047）倍,t=-17.74,P＆0.05],均较实验对照组明显降低,且2组蛋白水平间比较差异有统计学意义（t=-24.89,P＆0.05；t=-4.45,P＆0.05；t=-13.87,P＆0.05）。结论 DATS浓度≥200 μmol/L时能够抑制RA-FLSs的增殖,并抑制其分泌IL-6、MMP-1、VEGF,而且呈剂量依赖关系。