抑制长链非编码RNA-BG对人正常肺上皮细胞系Beas-2B放射敏感性的影响

摘要

目的探讨长链非编码RNA-BG对人正常肺上皮细胞Beas-2B放射敏感性的影响。方法设计合成长链非编码RNA-BG的siRNA,通过脂质体介导的转染法转入Beas-2B细胞;采用实时定量PCR法检测干扰后Beas-2B细胞内BG的转录水平。实验分母细胞对照组、对照siRNA转染组和BG-siRNA转染组。采用克隆形成实验检测长链非编码RNA-BG对Beas-2B细胞受照射后增殖活性的影响;流式细胞术检测受照射后细胞周期的改变;通过免疫荧光染色检测电离辐射损伤后细胞内γ-H2AX焦点形成情况。采用Western blot法对DNA损伤相关蛋白（RAD50、磷酸化P53、KU70、KU80、MDM2、CDK2和RB蛋白）进行检测。结果与对照siRNA转染组细胞相比,分别转染3组BG-siRNA 24 h后,Beas-2B细胞内长链非编码RNA-BG的转录丰度均显著下降（t=8.32~15.29,P＜0.05）,后续实验采用干扰效率最高的2号siRNA进行。采用siRNA干扰长链非编码RNA-BG,经0、0.5、1、2、4和6 Gy X射线照射后2周,采用多靶单击模型拟合曲线发现,与Beas-2B母细胞对照组和对照siRNA转染组细胞相比,放射增敏比（SER）为0.80和0.82。转染BG-siRNA的Beas-2B细胞经4 Gy X射线照射24 h后,细胞周期G2期比例由对照siRNA转染组的（37.37±0.63）%增至（64.19±1.01）%（t=30.65,P＜0.05）;Beas-2B细胞内γ-H2AX焦点数目（59±3.49）/100个细胞较对照siRNA转染组（76±1.78）/100个细胞显著降低（t=13.72,P＜0.05）;RAD50蛋白和磷酸化P53蛋白表达较对照siRNA转染组下降;KU70、KU80、MDM2、CDK2和RB蛋白较对照组表达增高。结论靶向抑制长链非编码RNA-BG可能通过诱导细胞周期阻滞、促进DNA损伤修复,进而调控人正常支气管上皮细胞Beas-2B的放射敏感性。