长链基因间非编码RNA-p21对乏氧肿瘤细胞放射敏感性的影响和机制研究

摘要

目的：本研究通过建立稳定转染敲低长链基因间非编码RNA-p21（lincRNA-p21）的细胞株，探讨敲低lincRNA-p21对乏氧肿瘤细胞放射敏感性的影响及其机制。
　　方法：实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测人肝癌细胞SMMC7721和脑胶质瘤细胞U251MG经不同剂量X射线照射和乏氧（1％ O2）培养不同时间后 lincRNA-p21的表达。构建含lincRNA-p21 shRNA慢病毒载体，经慢病毒转染建立稳定敲低lincRNA-p21的SMMC7721和U251MG细胞株。MTT实验检测细胞增殖，流式细胞术检测乏氧和常氧肿瘤细胞周期和凋亡，划痕实验检测细胞迁移，克隆形成实验检测肿瘤细胞放射敏感性，MDC染色法和Western blot检测细胞自噬。
　　结果：SMMC7721和U251MG细胞在2、4和6 Gy X射线照射后，lincRNA-p21表达随照射剂量增加逐渐升高。乏氧（1% O2）培养24和48 h，lincRNA-p21表达随培养时间递增。稳定转染lincRNA-p21 shRNA有效下调乏氧肿瘤细胞中lincRNA-p21表达。乏氧（1% O2）培养48 h，敲低lincRNA-p21细胞SMMC7721和U251MG发生G2/M期阻滞，细胞凋亡明显增加，抑制细胞增殖和迁移。相比较而言，常氧条件下敲低lincRNA-p21对人肝癌细胞和胶质瘤细胞增殖、周期、凋亡和迁移没有明显改变。敲低lincRNA-p21使乏氧肿瘤细胞中HIF-1α经泛素-蛋白酶体途径降解，GLUT1蛋白含量减少，并通过调控HIF-1/Akt/mTOR/P70通路抑制细胞自噬，提高乏氧肿瘤细胞放射敏感性，放射增敏比（SER）约为1.23、1.31。而常氧条件下敲低lincRNA-p21不改变肿瘤细胞放射敏感性。过表达HIF-1α增加了敲低lincRNA-p21乏氧肿瘤细胞自噬水平，降低了细胞放射敏感性。
　　结论：辐射损伤及乏氧均可提高SMMC7721和U251MG细胞中lincRNA-p21表达。敲低lincRNA-p21抑制增殖和迁移，提高了乏氧肿瘤细胞放射敏感性，可能与其诱导乏氧肿瘤细胞周期阻滞和凋亡，引发HIF-1α蛋白降解，调控HIF-1/Akt/mTOR/P70通路抑制细胞自噬有关，可以作为放疗增敏靶点进一步研究。

目录

封面

声明

中文摘要

英文摘要

目录

引言

参考文献

第一部分 LincRNA-p21辐射与乏氧诱导表达特性及其稳定敲低细胞系的建立

材料和方法

结果

讨论

参考文献

第二部分 敲低长链基因间非编码RNA-p21乏氧肿瘤细胞表型变化的研究

材料与方法

结果

讨论

参考文献

第三部分 敲低长链基因间非编码RNA-p21对乏氧肿瘤细胞放射敏感性的影响及其机制研究

材料和方法

结果

讨论

参考文献

结论

综述:LincRNA-p21研究进展

中英文对照缩略语词表

攻读学位期间公开发表的论文

致谢