多重PCR方法快速检测粪样中产气荚膜梭菌

摘要

建立了多重聚合酶链反应(multiplex PCR)检测产气荚膜梭菌的α-毒素和肠毒素(enterotoxin)基因.该方法可以检测猪粪便样品或小肠内容物中肠毒性产气荚膜梭菌.首先猪粪便样品经前处理后,接种选择性培养基,再挑取单个菌落溶于超纯水中,煮沸提抽,制备样品DNA,进行PCR检测.从实验中我们成功的扩增出324bp的α毒素基因片段和233bp的肠毒素基因片段.以人工污染样品10倍系例稀释后进行检测,该方法的检测灵敏度达到1.0×104CFU/g并对58份猪粪便样品检测,获得53株产气荚膜梭菌,分离率为91%,其中4株为带有肠毒素的产气荚膜杆菌,占整个分离菌株的7.5%.因此多重PCR方法在检测粪样中的产气荚膜梭菌是一种非常有用的方法并可以快速检出肠毒素,从而避免了使用动物作定型试验.