МЕТОД МУЛЬТИПЛЕКСНОЙ ПЦР ДЛЯ БЫСТРОГО ОБНАРУЖЕНИЯ Paenibacillus larvae В ГНИЛОСТНОЙ МАССЕ СОТ И КОЛОНИЯХ БАКТЕРИЙ

摘要

Разработан быстрый и чувствительный метод мультиплексной полимеразной цепной реакции для стандартной диагностики американского гнильца. Предложен новый подход для обнаружения Paenibacillus larvae в гнилостной массе. Исследовано 45 образцов такой массы из пчелиных сот, в которых предполагалось присутствие американского гнильца. В экспериментальную выборку также были включены следующие родственные культуры: эталонный штамм — Paenibacillus larvae (NBIM-СС 8478), культуры, выделенные из клинических образцов, 4 штамма близких видов бактерий. ДНК из бактериальных колоний выделяли стандартным методом, включающим нагревание и центрифугирование с использованием коммерческого набора (prepGem). Выделение ДНК из гнилостной массы сот проводилось в соответствии со стандартной и модифицированной процедурами. Для проведения мультиплексной ПЦР были использованы три пары праймеров, специфичных к 16S рРНК, и одна пара праймеров, специфичная для гена металлопротеазы (35 кДа) P. larvae в различных комбинациях. Чувствительность разработанного метода мультиплексной ПЦР для гнилостной массы составила 100%, что значительно превышало показатель чувствительности стандартного протокола (45.2%). Разработанный метод мультиплексной ПЦР может быть успешно использован для быстрогообнаружения Paenibacillus larvae как в гнилосной массе, так и в колониях выделенных бактерий.