应用多重PCR方法鉴定粪样和食品中产气荚膜梭菌及肠毒素阳性产气荚膜梭菌的基因型鉴定

摘要

产气荚膜梭菌是一种重要的人畜共患病的病原体,广泛存在于环境中的土壤、水源、人和动物肠道中.该研究首先采集346份粪便样品,按常规方法分离产气荚膜梭菌,再用生化反应试验和多重PCR方法鉴定了分离的产气荚膜梭菌.该研究又从275份食品样品中分离到97株产气荚膜梭菌,检出率为35.3％,其中以鲜虾、鲜鱼、鲜猪肉中的带菌率最高,分别达到89.3％、44.4％和37.9％.所有分离到的产气荚膜菌均为A型,未发现其它型的产气荚膜梭菌.该研究再根据cpe高度保守的开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)设计引物,以CPE阳性产气荚膜梭菌分离株为模板,扩增出960bp的cpeORF;通过测序,与CPE阳性产气荚膜梭菌标准株比较,发现产气荚膜梭菌分离株的960bp的cpe的ORF基因序列没有任何碱基突变,进一步证实了cpe的ORF高度保守性.利用该多重PCR方法检测4株CPE阳性A型产气荚膜梭菌标准株和两株CPE阳性A型产气荚膜梭菌分离株,其中2株致人食物中毒的CPE阳性产气荚膜梭菌标准株都检出了染色体型cpe,而另外1株致人非食源性胃肠疾病标准株检测到cpe-IS1470-like型质粒cpe和1株致人抗生素相关性腹泻标准株检测到cpe-IS1151型质粒cpe.因此该多重PCR方法可以快速区别引起人的胃肠疾病不同类型的CPE阳性A型产气荚膜梭菌.经本多重PCR反应鉴定证实分离到的两株CPE阳性A型产气荚膜梭菌均为染色体CPE阳性A型产气荚膜梭菌.综上所述,该研究应用的产气荚膜梭菌的多重PCR基因分型方法是一种简便、快速、准确的基因分型方法,可以避免采用动物毒素中和试验.并对采自粪便中和食品中的产气荚膜梭菌进行分离与鉴定,初步摸清了中国的粪便中和食品中的产气荚膜梭菌的类型.并在食品中发现了导致人食物中毒的CPE阳性A型产气荚膜梭菌,为分子流行病学研究提供了重要理论依据.此外该研究建立另一个多重PCR方法快速区分了携带染色体cpe和质粒cpe的产气荚膜梭菌,并证实了该次实验分离到的两株CPE阳性产气荚膜梭菌分离株是染色体CPE阳性的产气荚膜梭菌.

目录

符号说明

综述 产气荚膜梭菌引起的疾病及其诊断技术的研究进展

参考文献

论文 应用多重PCR方法鉴定粪样和食品中产气荚膜梭菌及肠毒素阳性产气荚膜梭菌的基因型鉴定

1、材料与方法

2、结果

3、讨论

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致 谢