禽呼肠孤病毒广西分离株σ3基因的克隆和表达

摘要

采用RT-PCR技术扩增禽呼肠孤病毒广西分离株R1σ3基因,将σ3基因克隆至PGEX-4T-1载体上,测序结果表明插入的片段为σ3目的基因.切下目的基因σ3,重组到含有谷胱甘肽(GST)的融合蛋白质粒表达载体PGEX-4T-1,获得重组质粒经PCR酶切以及序列分析鉴定,表达σ3基因插入的位置,大小和阅码框架均正确,表明成功构建了融合表达载体PGEX-R1-σ3.构建好的重组质粒,经1 mmol/L IPTG诱导,在大肠杆菌DH5α中得到了表达.融合蛋白GST-R1-σ3的分子量为60 ku,以包涵体形式存在.Western blot分析表明,融合蛋白能够与ARV阳性血清发生特异性反应,表明该重组蛋白具有良好的抗原性和特异性.