禽呼肠孤病毒C-98、T-98分离株S4基因的克隆与序列分析

摘要

参考GenBank中禽呼肠孤病毒176株(ARV 176)S4基因序列设计两对引物,分别提取禽呼肠孤病毒T-98和C-98分离株病毒总RNA,应用RT-PCR技术扩增病毒的S4基因,将纯化的目的 DNA与pEASY-T1载体连接、转化后测序。应用计算机软件将所测定序列与参考毒株序列进行比较,结果显示,S4基因核苷酸序列长为1 192bp,均含1个完整的开放性阅读框(24～1 127)。ARV T-98和ARV C-98分离株S4基因的核苷酸同源性很高,为99.9%;与参考毒株ARV 1733、ARV S1133、ARV 750505、ARV 601SI、ARV 919、ARV T6、ARV OS161和DRV YJL S4基因的核苷酸同源性均较高,在99.4%～99.9%之间;与ARV 601G、ARV 1017-1、ARV 916、ARV 918和DRV S14S4基因的核苷酸同源性在80.1%～83.6%之间;与NBV、BRV和MRV 3的S4基因核苷酸同源性在2.4%～53.1%之间。进化树分析显示:11株禽呼肠孤病毒分离株和ARV T-98、C-98分离株的S4基因可分成3个不同的系谱。