稳定表达犬瘟热病毒细胞受体SLAM的BHK-21/SLAM细胞系的建立

摘要

为建立稳定表达犬瘟热病毒(CDV)受体,即信号淋巴细胞激活因子(SLAM)的BHK-21细胞系,本研究将重组表达质粒pDisplay-SLAM转染于BHK-21细胞,通过G418压力筛选并结合有限稀释法、免疫荧光、RT-PCR和western blot筛选出稳定表达SLAM的阳性细胞(BHK-21/SLAM).病毒感染试验结果显示,CDV在BHK-21细胞中无细胞病变(CPE)产生,而感染BHK-21/SLAM细胞12h后即可出现CPE;BHK-21/SLAM细胞培养物上清液中的CDV核酸含量于24 h达到最高值(107 9拷贝/μL),明显高于对照组BHK-21细胞培养物上清液中的核酸含量(106 28拷贝/μL).研究结果表明,与BHK-21细胞相比较,CDV在BHK-21/SLAM细胞中的病毒核酸含量更高,并能够产生明显的CPE.该细胞系的建立在CDV的分离、生物学特性研究和疫苗毒生产等方面具有良好应用前景.