比格犬IFN-α和IFN-β mRNA SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR检测方法的建立

摘要

为检测比格犬α和β-干扰素(CaIFN-α和CaIFN-β),本研究根据GenBank中登录的IFN-α和IFN-β基因序列,分别设计合成特异性引物,以犬3-磷酸甘油脱氢酶(GAPDH) mRNA为内参,建立SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测方法.通过RT-PCR分别扩增IFN-α、IFN-β和GAPDH的基因片段,并克隆于pMD19-T载体中制备标准品,建立荧光定量RT-PCR标准曲线.结果表明:IFN-α和IFN-β和GAPDH基因的Ct值与标准品稀释度在1×102拷贝/μL～1×108拷贝/μL内均呈良好的线性关系,相关系数均大于0.994.组内组间变异系数均小于3％,特异性和重复性较好.同时采用常规RT-PCR方法与本研究建立的方法对30份临床样品检测,结果显示IFN-α和IFN-β的阳性符合率分别为96.43％和96.55％.本研究建立的检测方法为比格犬IFN mRNA的定量分析提供了有效手段.