白藜芦醇抑制蛋白激酶B磷酸化缓解大鼠肌成纤维细胞形成及肾纤维化

摘要

目的 探讨白藜芦醇对大鼠肌成纤维细胞形成及肾纤维化的影响.方法 制备大鼠单侧输尿管梗阻(UUO)模型,白藜芦醇干预组于手术当天ig给予白藜芦醇20 mg·kg-1,术后第7天取其梗阻侧肾脏进行检测.HE和Masson染色分别观察肾组织病理改变和纤维化程度;免疫组织化学染色检测肌成纤维细胞标志物α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达.体外分别培养肾小管上皮细胞(NRK-52E)和成纤维细胞(NRK-49F),各分为3组:细胞对照组,转化生长因子 β1(TGF-β1)5μg·L-1诱导组和TGF-β15μg·L-1+白藜芦醇10或100 mmol·L-1干预组.细胞免疫荧光染色检测 α-SMA、细胞外基质成分(Ⅲ型胶原)和上皮细胞标志物E-钙黏着蛋白的表达;Western蛋白印迹法检测细胞或组织中蛋白激酶B(AKT)磷酸化.结果 与假手术组相比,HE染色显示UUO模型组肾间充质面积扩大(P<0.01),Masson染色显示UUO模型组胶原累积明显(P<0.05);白藜芦醇干预组上述改变均被抑制(P<0.05),α-SMA阳性肌成纤维细胞的形成亦被抑制(P<0.05).体外应用TGF-β1刺激后,与细胞对照组相比,TGF-β15μg·L-1诱导组 α-SMA表达增加(P<0.01),提示细胞表型转化为肌成纤维细胞数量明显增加,同时伴随着Ⅲ型胶原过度累积(P<0.01);白藜芦醇干预组上述改变被抑制(P<0.05).进一步研究发现,在肌成纤维细胞产生过程中,AKT磷酸化水平增加(P<0.05);白藜芦醇干预后,体内外AKT磷酸化升高均被抑制(P<0.01).结论 白藜芦醇可能通过拮抗AKT的磷酸化,抑制TGF-β1所诱导的NRK-52E和NRK-49F表型转化为肌成纤维细胞,进而减少基质累积,缓解肾纤维化.