构建以荧光共振能量转移技术为基础的生物学活性前列腺特异抗原检测器

摘要

目的构建可在体外应用荧光共振能量转移(FRET)技术检测具有酶活性的前列腺特异抗原(PSA)的生物检测器.方法构建原核细胞表达质粒,从而在大肠杆菌中表达在供体和受体荧光蛋白之间以PSA特异性识别氨基酸序列SSYYSG连接的融合蛋白.将纯化的融合蛋白依次用糜蛋白酶、胰蛋白酶、商品化的纯品PSA及精液切割,检测其荧光共振能量转移现象的变化.结果糜蛋白酶、商品化的纯品PSA及精液切割均可有效抑制融合蛋白的FRET现象,并表现出对时间和剂量的依赖关系.而胰蛋白酶在90 min内未见FRET抑制现象.结论本研究构建的FRET检测器可成功检测具有酶活性的PSA,为活性PSA的检测提供一种可选择的途径.