采用基因打靶技术构建结核分枝杆菌新基因 Rv0901缺失株的研究

摘要

目的:利用基因打靶技术构建基因打靶载体和基因缺失株,用于结核分枝杆菌基因Rv0901功能的研究.方法:结核分枝杆菌标准株H37Rv体外培养,对其Rv0901基因及两侧序列进行体外扩增,连接载体及目的片段,切除目的基因,再引入筛选标志构建重组自杀质粒,分别用酶切及PCR鉴定;用电穿孔法将重组自杀质粒转入结核杆菌H37RV株,用PCR鉴定.结果:经鉴定PCR产物及插入片段大小与预期值相符,且为所需目的基因片段,成功切除靶片段;蓝白斑筛选证实标记基因插入片段插入方向正确;Rv0901基因缺失株用PCR鉴定成功缺失了目的基因片段2.5kb.结论:成功构建了用于结核分枝杆菌基因打靶的置换型载体和Rv0901新基因缺失株,为Rv0901基因功能的研究莫定了基础.