巨噬细胞移动抑制因子活性抑制肽的筛选和鉴定

摘要

目的：巨噬细胞移动抑制因子（macrophage migration inhibitory factor，MIF）参与了多种病理生理过程，如多种类型的感染以及关节炎、肾小球肾炎等自身免疫疾病以及动脉粥样硬化的发生、形成过程。本文将利用酵母双杂交技术从预制随机肽库中筛选能有效抑制MIF活性的多肽，为研制MIF活性抑制剂提供候选分子。方法：利用亚克隆技术，构建“诱饵”载体pGBKT7-MIF。将pGBKT7-MIF与预制随机肽库质粒DNA共转化酵母Y190，进行酵母双杂交实验。从SD／-Leu／-His／-Trp／＋3-AT板上挑取阳性酵母克隆，扩增并提取阳性克隆的质粒DNA，再与pGBKT7-MIF行酵母双杂交以排除假阳性克隆。测定获得的克隆质粒上短肽的编码序列，并分别人工合成一定量的短肽。利用巨噬细胞移动抑制实验和血管内皮细胞成管腔实验测定短肽对MIF活性的抑制作用。