抑制人巨噬细胞移动抑制因子(MIF)表达的siRNA的筛选和鉴定

摘要

目的:研究靶向MIFmRNA的siRNA对细胞内MIF表达的抑制作用,筛选出能有效抑制MIF表达的siRNA.方法:将MIF的真核表达载体pSecTag2C-MIF转染293细胞,用Zeocin加压培养,建立稳定表达MIF的293细胞株.设计4条靶向人MIFmRNA的候选siRNA,同时设计1条无关siRNA作为对照,利用T7RNA转录试剂盒进行体外合成.用Oligofectamine分别将5条siRNA以200nM的浓度分别转染293-MIF细胞,行半定量RT-PCR检测MIFmRNA表达水平.分别构建上述5条siRNA的真核表达载体,用Lipofectamine2000分别将重组质粒转染293-MIF细胞,鉴定表达载体介导的siRNA对MIFmRNA表达的影响.将能有效抑制MIF表达的siRNA表达载体转染293-MIF细胞后,与人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)共培养,用MTT法检测HUVECs的增殖情况,用半定量RT-PCR检测HUVECs中ICAM1的表达水平.结论:通过筛选体外和细胞内转录合成的靶向MIF的siRNA,确定MIFsiRNA3可以有效地抑制MIF的表达.