人外周血来源内皮祖细胞诱导分化为心肌样细胞的实验研究及机制探讨

摘要

目的:研究人外周血来源内皮祖细胞(EPCs)在体外定向分化为心肌样细胞的能力及其可能机制.方法:分离培养及鉴定健康人群(对照组)及冠心病(CAD)患者(实验组)EPCs.将对照组及实验组EPCs分别分成3组在体外进行分化诱导实验:A组EPCs与乳鼠心肌共培养;B组EPCs与多聚甲醛固定后的乳鼠心肌共培养;C组于EPCs中加入收集到的乳鼠心肌培养液上清诱导培养.观察心肌样细胞形态变化;2周后免疫荧光法检测心肌肌钙蛋白(cTnT)和结蛋白(desmin)的表达;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测心肌相关基因ANP、cTnT、cTnI和主要组织相容性复合物α链(αMHC)的表达;流式细胞仪检测HLA-DR和人desmin的表达,计数desmin阳性表达细胞.结果:实验及对照A、B组EPCs均可呈现心肌样细胞形态;ANP、cTnT、cTnI和αMHC基因及cTnT和dgsmin蛋白均呈阳性表达;流式检测HLA-DR及desmin呈双阳性表达,对照A组分化率为(9±2)%,实验A组分化率约为(4±1)%,差异显著(P＜0.01).实验及对照C组EPCs形态未发生变化,各项检测指标均为阴性表达.结论:与乳鼠心肌共培养可诱导人外周血来源EPCs分化为心肌样细胞,且其可能机制为细胞间的直接接触.