心肌样细胞

摘要： 背景:干细胞已成为组织工程中理想的种子细胞,为细胞移植治疗心肌梗死提供了研究方向.目的:探讨骨形态发生蛋白2联合5-氮胞苷体外诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的可行性.方法:采用全骨髓贴壁法培养骨髓间充质干细胞,将第3代骨髓间充质干细胞进行分组诱导,分别为对照组(普通IMDM培养基)、骨形态发生蛋白2组(200 ng/L)、5-氮胞苷组(10μmol/L)、5-氮胞苷+骨形态发生蛋白2组.诱导3 d后更换正常培养基继续培养4周,免疫细胞化学法检测cTnI的表达,免疫荧光化学法检测Desmin、cTnT的表达,Western blot检测cTnT和cTnI的表达;诱导3 d后更换正常培养基继续培养1,2,4周,采用RT-qPCR检测心肌早期转录因子GATA-4、Nkx2.5 mRNA的表达.结果 与结论:①Western blot检测诱导组均表达cTnT、cTnI,联合诱导组cTnT、cTnI的表达高于单独诱导组(P<0.01);②免疫细胞化学法检测诱导组cTnI均呈阳性表达,联合诱导组高于单独诱导组(P<0.05);免疫荧光细胞化学法检测诱导组Desmin、cTnT均呈阳性表达,联合诱导组高于单独诱导组(P<0.05);③RT-qPCR检测诱导组均有GATA-4、Nkx2.5 mRNA的表达,联合诱导组高于单独诱导组(P<0.05);④结果表明,骨髓间充质干细胞经5-氮胞苷和骨形态发生蛋白2联合诱导后可以提高心肌样细胞的分化效率.

摘要： 目的探讨原代人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,hAMSCs)体外分离培养的方法及向心肌样细胞分化的能力。方法收集人正常足月顺产或剖宫产后胎盘羊膜,采用机械-酶消化法分离培养hAMSCs,观察其形态学特点。取第3代hAMSCs,通过诱导成骨、成脂分化和流式细胞术检测鉴定其干细胞特性,体内接种法和体外软琼脂克隆法检测其致瘤性。应用5-aza、TGF-β1及Ang-Ⅱ诱导其向心肌样细胞分化(实验组),镜下观察细胞形态学变化;qRT-PCR、Western blot及细胞免疫荧光法分别检测心肌细胞标志基因cTnI、ACTN2、NKX2.5及其蛋白的表达;CCK-8实验检测细胞活性;淋巴细胞增殖实验检测细胞免疫原性。结果分离纯化后的hAMSCs呈梭形,漩涡状生长,可成功诱导向成骨、成脂分化;流式细胞术结果显示hAMSCs高表达CD44、CD90,低表达CD45,不表达HLA-DR;体内外实验未显示致瘤性。诱导hAMSCs向心肌样细胞分化后,细胞呈棒状或长梭形,胞间见细丝样连接结构,与对照组相比,实验组中cTnI、ACTN2、NKX2.5基因及其蛋白水平明显升高,且保持良好的细胞活性及低免疫原性,差异有统计学意义(P<0.05)。结论hAMSCs可在体外分离培养且能够被诱导向心肌样细胞分化,为心肌疾病的再生修复治疗提供了新的种子细胞。

摘要： 背景:骨髓间充质干细胞可定向诱导分化形成心肌组织样结构,但利用不同部位的心肌组织制备心肌组织裂解液构建有差异的微环境,探讨骨髓间充质干细胞定向诱导效率以及相关基因表达的研究甚少.目的:探究不同部位心肌组织裂解液对骨髓间充质干细胞定向分化为心肌样细胞的影响,评价诱导过程中相关基因的表达与心肌组织工程构建的关联.方法:选择第3代SD大鼠乳鼠骨髓间充质干细胞,采用全心组织裂解液、心房肌组织裂解液、心室肌组织裂解液构建不同的微环境诱导骨髓间充质干细胞定向分化为心肌样细胞.倒置显微镜、透射电镜观察细胞的形态变化及其超微结构;免疫荧光染色检测α-actin、cTnI的表达;qRT-PCR检测诱导后ANP、HCN4及MLC-2v基因的表达.结果与结论:①各诱导组的细胞均遵循相似的形态学变化规律,心肌样细胞都能够发生自律性搏动、节律性的收缩和舒张,透射电镜可见大量整齐排列的肌丝,免疫荧光染色α-actin、cTnI均有阳性表达;②全心组织裂解液诱导组能够形成米粒大小、含胶原纤维的心肌组织样结构;③心房肌组织裂解液诱导骨髓间充质干细胞定向分化形成的心房肌样细胞,自律性搏动出现较早、但搏动频率和时间较短,培养液中出现大量分泌颗粒,ANP和HCN4在心房肌样细胞中高表达;④心室肌组织裂解液诱导形成的心室肌样细胞无分泌颗粒,MLC-2v在心室肌样细胞高表达;⑤结果表明,全心组织裂解液可诱导骨髓间充质干细胞形成心肌组织样结构,心房肌组织裂解液可诱导骨髓间充质干细胞向心房肌样细胞分化,心室肌组织裂解液可诱导骨髓间充质干细胞向心室肌样细胞分化.通过构建特定的微环境,骨髓间充质干细胞可以定向分化形成不同部位的心肌样细胞,为心肌组织工程的构建积累实验室数据.

摘要： 背景:骨髓间充质干细胞可定向诱导分化形成心肌组织样结构,但利用不同部位的心肌组织制备心肌组织裂解液构建有差异的微环境,探讨骨髓间充质干细胞定向诱导效率以及相关基因表达的研究甚少。目的:探究不同部位心肌组织裂解液对骨髓间充质干细胞定向分化为心肌样细胞的影响,评价诱导过程中相关基因的表达与心肌组织工程构建的关联。方法:选择第3代SD大鼠乳鼠骨髓间充质干细胞,采用全心组织裂解液、心房肌组织裂解液、心室肌组织裂解液构建不同的微环境诱导骨髓间充质干细胞定向分化为心肌样细胞。倒置显微镜、透射电镜观察细胞的形态变化及其超微结构;免疫荧光染色检测α-actin、cTnI的表达;qRT-PCR检测诱导后ANP、HCN4及MLC-2v基因的表达。结果与结论:①各诱导组的细胞均遵循相似的形态学变化规律,心肌样细胞都能够发生自律性搏动、节律性的收缩和舒张,透射电镜可见大量整齐排列的肌丝,免疫荧光染色α-actin、cTnI均有阳性表达;②全心组织裂解液诱导组能够形成米粒大小、含胶原纤维的心肌组织样结构;③心房肌组织裂解液诱导骨髓间充质干细胞定向分化形成的心房肌样细胞,自律性搏动出现较早、但搏动频率和时间较短,培养液中出现大量分泌颗粒,ANP和HCN4在心房肌样细胞中高表达;④心室肌组织裂解液诱导形成的心室肌样细胞无分泌颗粒,MLC-2v在心室肌样细胞高表达;⑤结果表明,全心组织裂解液可诱导骨髓间充质干细胞形成心肌组织样结构,心房肌组织裂解液可诱导骨髓间充质干细胞向心房肌样细胞分化,心室肌组织裂解液可诱导骨髓间充质干细胞向心室肌样细胞分化。通过构建特定的微环境,骨髓间充质干细胞可以定向分化形成不同部位的心肌样细胞,为心肌组织工程的构建积累实验室数据。

摘要： 目的探讨微小RNA(micro RNA,miR)-19b对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem sells,BMSCs)分化的影响,并研究其协同5-氮胞苷(5-azacytidine,5-aza)对BMSCs分化成心肌样细胞的作用。方法分离培养SD大鼠BMSCs,细胞鉴定后使用miR-19b mimics/inhibitor转染BMSCs,实时荧光定量聚合酶链反应(real time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测转染效率。采用10μmol/L 5-aza干预转染后的BMSCs,观察细胞形态学变化。采用Western blot检测诱导后BMSCs中心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)、心肌肌钙蛋白I(cardiac troponin I,cTnI)、和心肌肌钙蛋白T(cardiac troponin T,cTnT)表达。结果与5-aza诱导的BMSCs相比,miR-19b mimics转染后的BMSCs无明显形态学变化,5-aza诱导的miR-19b mimics组细胞形态变化最大,细胞体积变大,细胞聚集呈涡旋样,而5-aza诱导的miR-19b inhibitor组细胞形态变化不明显。与对照组比较,miR-19b mimics组ANP、cTnI及cTnT蛋白表达水平明显升高,而miR-19b inhibitor组ANP、cTnI及cTnT蛋白表达水平明显降低。结论miR-19b无诱导BMSCs分化的能力,但协同5-aza诱导BMSCs可提高其向心肌样细胞分化的能力。

摘要： 骨髓间充质干细胞是具有多向分化潜能的成体干细胞,诱导骨髓间充质干细胞诱导分化心肌样细胞的方法,主要有化学诱导法以及生物环境诱导法,而大部分化学诱导剂存在一定的毒性高、安全性低的副作用,目前已有很多研究应用中药或单体成分体外诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化,较前更安全有效,而关于参附注射液体外诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌细胞以及相关机制则鲜见文献报道,现将初步研究结果报道如下.本实验初步探讨了参附注射液预处理联合5-aza体外诱导MSCs分化为心肌样细胞的作用，研究结果显示从分化细胞的形态学到特异性抗体表达，都表明MSCs在参附注射液体外作用提高向心肌样细胞转化率，具备心肌的特性，而参附注射液诱导分化的心肌细胞是否具备起搏性能，能否重建窦房结或房室结功能，为干细胞移植治疗缓慢性心律失常重建生物学起搏功能提供思路，也是课题组研究所想解决的下一个方向。

摘要： 目的:探索小鼠棕色脂肪干细胞(ADSCs)向心肌样细胞诱导分化.rn 方法:取C57小鼠肩胛区棕色脂肪,用二型胶原酶(0.1％)消化,裂解掉血细胞后,将离心沉淀的细胞用含15％血清的DMEM培养基培养,每三天观察并换液.rn 结果:ADSCs贴壁后呈长梭形,第6天出现肌管样结构,第8天部分细胞开始节律性自主收缩;细胞高表TNT T、TNT I和HCN4,电镜、电生理检测以及分子生物学实验正在进行中.rn 结论:小鼠棕色脂肪ADSCs可以自发向心肌样细胞分化.

摘要： 目的：研究心脏营养素-1(CT-1)是否能促进经5-氮杂胞苷(5-AZA)诱导的UCMSCS分化为心肌样细胞,并通过实时荧光定量PCR SYBR Green染料法检测基因Alpha-cardiac actin、Beta-MHC、GATA4、Nkx2-5的表达量并进行分析.方法：自健康足月妊娠孕妇脐带分离、纯化UCMSCS,培养后分析细胞生长曲线及流式细胞仪测定细胞生长周期.取第4代UCMSCS分别以普通培养基(A组)、加入含0.1nmol/L心脏营养素-1(CT-1)的培养基(B组)、经10umol/L5-aza诱导后加入普通培养基(C组)及10umol/L5-aza加入含不同浓度CT-1的培养基D组(包括D10.01nmol/L、D20.1nmol/L、D31nmol/L)培养.各目的基因分别设计一对引物,并进行SYBR Green染料法定量PCR扩增,使用2-△△CT法计算各分组中目的基因的表达差异.结果：基因Alpha-cardiac actin:D组表达均较空白组明显增加,以D2组为著,差异有统计学意义(P＜0.05);基因Beta-MHC:表达未见增加;基因GATA4:D组表达均较空白组增加,以D1组为著,差异有统计学意义(P＜0.05);基因Nkx2-5:D组表达均较空白组增加,以D3组为著,差异有统计学意义(P＜0.05).结论：从脐带分离培养的细胞具有UCMSCS的生物学特性.CT-1可明显促进5-AZA诱导的UCMSCS分化为心肌细胞,不同的相关基因的表达增加量与CT-1的浓度有关.

摘要： 目的：研究P38MAPK通路在BMP9诱导C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化中的作用。rn 方法：免疫印迹检测经pAdEasyBMP9诱导24 h的C3H10T1/2细胞磷酸化P38MAPK和P38MAPK表达水平,免疫荧光定位磷酸化P38MAPK;SB203580抑制C3H10T1/2细胞磷酸化P38MAPK活性,pAdEasyBMP9诱导21天时免疫印迹检测心肌特异性蛋白CX43,cTnT的表达,免疫荧光检测心肌特异性蛋白cTnT、α-MHC的表达,Q-RT-PCR检测心肌特异性基因GATA4,MEF-2C的表达。rn 结论：pAdEasyBMP9诱导C3H10T1/2细胞能激活P38MAPK通路，并促进其向心肌样细胞分化。

摘要： 为了证实来源于早胚心管的祖细胞即胚胎心脏祖细胞分化为成熟心肌细胞的潜力，本研究采用心脏成纤维细胞条件培养液和5-氮胞苷联合处理的方法，诱导人胚胎心脏祖细胞向心肌细胞方向分化。实验结果表明人胚胎心脏祖细胞被诱导后，细胞形态发生了改变;免疫荧光检测心肌肌动蛋白由阴性变为阳性、Western Blot检测心肌肌动蛋白表达亦明显升高;RT-PCR检测心肌特异分子标志物心肌肌球蛋白重链、GATA-4的表达升高;透射电镜观察出现了明显连续的肌节结构;证明了胚胎心脏祖细胞已经被诱导为心肌样细胞。上述研究结果提示，人胚胎心脏祖细胞有潜力分化为成熟心肌细胞，在干细胞移植治疗心梗及心肌组织工程研究中有良好的应用前景。

摘要： [目的]本研究探讨了淫羊藿苷(ICA)对小鼠胚胎干细胞(mESCs)定向分化为心肌样细胞的效果。[方法]试验以mESCs分化培养液为空亡对照组，分别添加淫羊藿苷的10-6mol/L(1CA 1)、10-7mol/L,(ICA 2)、10-8 mol/L(ICA 3)3个剂量为试验组，对诱导后培养4周的mESCs，采用免疫细胞化学法鉴定诱导后细胞中肌动蛋白T(cTnT)表达，并计算心肌样细胞分化率; 采用RT-PCR鉴定诱导后mESCs中心肌特异性基因MLC-2v、α-MHC、β-MHC，Nkx2.5、GATA-4的表达。[结果]结果在诱导后细胞中有心肌特异性蛋白cTnT表达; ICA2组分化率显著高于对照组和其他剂量组; 且诱导后细胞有心肌特异性基因MLC-2v、α-MHC、β-MHC、Nkx2.5、GATA-4表达。[结论]结果表明，ICA可在体外诱导mESCs定向分化为心肌样细胞，10-7 mol/L ICA为最佳诱导浓度。

摘要： 目的:研究5-氮胞苷(5-Aza)对培养人骨髓间充质干细胞(MSC)的作用,并对分化后的心肌样细胞进行鉴定.方法:采用密度梯度离心法分离到骨髓单个核细胞(MB-MNC),用含200ml/L胎牛血清的低糖型DMEM培养液进行培养.采用差速贴壁法纯化MSC,用流式细胞仪检测细胞表面抗原.以-Aza诱导第3代MSC 24 b后继续培养.培养4周,用免疫细胞化学染色法榆测肌系标记抗原:α-肌动蛋白(α-actin)及心肌细胞特异性标记抗原:肌钙蛋白T(cTnT);在透射电镜下观察细胞的超微结构.结果:MSC经5-Aza诱导分化后,可表达α-actin和cTnT,未经诱导的同培养天数的MSC中均未见表达.透射电镜可观察到肌丝等心肌细胞的特异性结构.结论:5-Aza可诱导MSC分化为心肌样细胞.

摘要： 目的:观察复方丹参滴丸含药血清体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为心肌样细胞特异基因的表达。rn 方法:分离培养大鼠MSCs,流式细胞仪鉴定细胞表面标记;采用复方丹参滴丸的含药血清体外定向诱导第四代MSCs,观察特异基因GATA-4的表达。rn 结果:大鼠MSCs细胞表面抗原CD90、CD106阳性,CD34、CIM5、CD31阴性。经含药血清、5-Aza体外诱导大鼠MSCs,细胞上清液中调节心肌发生的专有基因GATA-4的浓度有明显改变。rn 结论:复方丹参滴丸可能调控心肌发生的专有基因GATA-4的作用,启动细胞向心肌样细胞方向分化。

摘要： 目的：观察复方丹参滴丸含药血清体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为心肌样细胞特异基因的表达。rn 方法：分离培养大鼠MSCs，流式细胞仪鉴定细胞表面标记：采用复方丹参滴丸的含药血清体外定向诱导第四代MSCs，观察特异基因GATA-4的表达。rn 结果：大鼠MSCs细胞表面抗原CD90、CD106阳性， CD34、CD45、CD31阴性。经含药血清、5-Aza体外诱导大鼠MSCs，细胞上清液中调节心肌发生的专有基因GATA-4的浓度有明显改变。rn 结论：复方丹参滴丸可能调控心肌发生的专有基因GATA-4的作用，启动细胞向心肌样细胞方向分化。

摘要： 目的:利用小鼠骨髓间充质干细胞体外诱导出心肌样细胞，并与聚乳酸补片融合，初步构建心肌组织工程补片;为进一步在体外构建组织工程生物补片及研究生物补片在治疗缺血性心脏病中阻抑心室重构和改善心功能的作用提供研究基础。rn 方法:原代培养小鼠骨髓间充质干细胞，分离、纯化后用5-AZA向心肌细胞诱导，取P3代BMSCs和诱导得到的心肌样细胞分别种植于PDLLA补片上，常规培养，病理学检测细胞与补片的融合情况。rn 结果:将BMSCs种植于PDLLA补片表面约2～3 w后可见形成薄层细胞膜，加入诱导剂后继续培养可见细胞膜增厚;诱导得到的心肌细胞种植于PDLLA补片表面较难融合生长，约3～5 d后细胞出现悬浮、死亡。rn 结论:BMSCs能够与聚乳酸补片有效融合，但诱导得到的心肌样细胞与聚乳酸材料相容性较差。

摘要： 包括心肌细胞样细胞的簇，其中所述簇具有：i)收缩细胞，ii)电连接的细胞，和表达iii)心脏标记包括Nkx.2.5、肌钙蛋白和肌球蛋白，iv)用于功能性肾上腺素能受体的标记，v)用于功能性毒蕈碱受体的标记，vi)用于功能性离子通道的标记，包括hERG，Na+，Ca2+和K+通道，vii)一种或多种选自AFP，TF，APOA2，AHSG，SERPINA1，APOA1，APOC3，TTR1，APOB和RBP4的内胚层标记。描述了用于制备该簇的方法和该簇在药物发现和毒性筛选中的用途。

摘要： 本发明提供了红景天及红景天苷在诱导干细胞定向分化为心肌样细胞中的应用，尤其是红景天苷与低氧联合作为诱导剂用于诱导脂肪间充质干细胞定向分化为心肌样细胞。本发明开拓了红景天苷的新用途，即体外诱导脂肪干细胞等干细胞定向分化为心肌样细胞；提供了红景天及红景天苷在诱导成体干细胞定向分化为心肌样细胞中的作用，有利于体内干细胞移植治疗急慢性心肌损伤及心血管疾病领域的深入研究，为新药开发提供了基础。

摘要： 本发明提供了氧化型低密度脂蛋白在诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞定向分化中的应用，实验证明，在骨髓间充质干细胞的培养基中添加浓度为5μg/mL的氧化型低密度脂蛋白，BMMSCs具有显著的细胞增殖，并能检测到心肌样细胞特异性蛋白和心肌细胞标志性分子的表达，表明骨髓间充质干细胞向心肌样细胞定向分化，其心肌样细胞转化率高达30％。

摘要： 本发明涉及干细胞培养技术领域，尤其涉及一种细胞培养液及其应用和诱导牙周膜干细胞向心肌样细胞分化的方法。本发明提供的培养液中包括基础培养液、FBS、5‑aza和Ang‑II。本发明提供的培养液能够提高牙周膜干细胞向心肌样细胞分化的分化率并缩短分化的时间。对各组细胞的分化率进行计算，结果显示实验组细胞的分化率显著高于对照组，(p<0.01)。

摘要： 本发明涉及干细胞培养技术领域，尤其涉及一种细胞培养液及其应用和诱导骨骼肌干细胞向心肌样细胞分化的方法。本发明提供的培养液中包括基础培养液、FBS、5‑aza和TGFβ。本发明提供的培养液能够诱导骨骼肌干细胞分化为心肌样细胞，且能够提高骨骼肌干细胞向心肌样细胞分化的分化率并缩短分化的时间。诱导四周后，对各组细胞的分化率进行计算，结果显示实验组细胞的分化率显著高于对照组，(p<0.05，或p<0.01)。

摘要： 本发明提供了红景天及红景天苷在诱导干细胞定向分化为心肌样细胞中的应用，尤其是红景天苷与低氧联合作为诱导剂用于诱导脂肪间充质干细胞定向分化为心肌样细胞。本发明开拓了红景天苷的新用途，即体外诱导脂肪干细胞等干细胞定向分化为心肌样细胞；提供了红景天及红景天苷在诱导成体干细胞定向分化为心肌样细胞中的作用，有利于体内干细胞移植治疗急慢性心肌损伤及心血管疾病领域的深入研究，为新药开发提供了基础。

摘要： 本发明属于中药技术领域，公开了一种对骨髓间充质干细胞分化心肌样细胞诱导药物及检测方法，制备浙麦冬含药血清；制备心肌细胞提取以及裂解液；对大鼠骨髓MSCs进行分离与培养；利用细胞流式仪鉴定大鼠骨髓MSCs的表面标志物；对大鼠骨髓MSCs细胞进行培养；利用免疫荧光检测心肌样细胞相关蛋白CTnI和CX43的表达；采用qPCR法检测心肌样细胞NKx2.5、GATA‑4、β‑MHC mRNA的表达。本发明建立了高效率、系统性的研究模式用于具有潜在诱导能力中药的批量寻找及研究，为完善中药诱导剂的筛选与开发体系奠定基础，为中药诱导作用的研究提供新的思路，同时对提高MSCs自体移植的成功率，降低患者的死亡率，早期防治冠心心衰等疾病的发生、发展等有重要意义。

摘要： 本发明属于干细胞领域，公开了一种诱导牙髓干细胞向心肌样细胞分化的组合物及方法。本发明所述诱导牙髓干细胞向心肌样细胞分化的组合物，由5‑氮杂胞苷和PFT‑a组成。本发明所述诱导牙髓干细胞向心肌样细胞分化的方法，为牙髓干细胞预培养后更换含FBS和本发明所述诱导牙髓干细胞向心肌样细胞分化的组合物的DMEM/F12培养基诱导培养，然后更换含FBS的DMEM/F12培养基维持培养。所述牙髓干细胞自体取材方便，来源丰富，易于体外扩增，可以用于自体移植，从而避免了免疫排斥反应。实验表明本发明采用5‑氮杂胞苷和PFT‑a两种诱导因子联合应用作用于牙髓干细，能有效的诱导DPSCs向心肌样细胞分化。

摘要： 本发明提供了Rspo1诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的应用。以腺病毒为载体，将Rspo1转染大鼠骨髓间充质干细胞，经5‑氮杂胞嘧啶核苷诱导分化，可以检测到心肌样细胞的心肌细胞特异性蛋白表达，且表达量显著增加，表明Rspo1促进了骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化，其心肌样细胞转化率高达53%。

摘要： 本发明涉及医学领域，公开了一种诱导人羊膜间充质干细胞向心肌样细胞分化的诱导液及方法。本发明所述诱导液为包括胎牛血清、5‑氮杂胞苷、血管紧张素II和转录生长因子β1的DMEM/F12培养液。本发明在传统的诱导剂5‑氮杂胞苷基础上，额外添加了血管紧张素II和转录生长因子β1两种适宜组分，利用三者的联合作用共同诱导羊膜间充质干细胞分化为心肌样细胞，能够显著提高羊膜间充质干细胞的诱导分化率。