应用荧光高效液相法检测心肌磷脂酶D的活性

摘要

目的:为心肌磷脂酶D活性的检测提供新的可靠、灵敏的实验方法.方法:提取心肌膜脂质,以荧光标记的磷脂酰胆碱及乙醇为底物.高效液相色谱条件:LiChrosphere 100色谱柱(250 mm ×4 mm,5μm)为固定相,流动相A液为正已烷-丙醇-冰醋酸(82∶17∶1,V∶V∶V),流动相B液为丙醇-水-冰醋酸(85∶14∶1,V∶V∶V),柱温45℃,流速1 mL/min,梯度洗脱.荧光检测:激发波长475 nm,发射波长515 nm.结果:PLD标准品在0.625-40 pmol范围含量与峰面积呈线性关系,相关系数0.999;孵育时间在0-45 min,磷脂酰乙醇生成量与孵育时间呈直线相关;日内及日间变异系数分别为5.6%、6.9%.小鼠心肌样品色谱图见二酯酰甘油、磷脂酰乙醇、磷脂酸3个峰,心肌磷脂酶D活性检测水平为nmol·h-1·g-1.结论:荧光高效液相法是检测心肌磷脂酶D活性的简便、快速、准确、灵敏的实验方法.