表达CD20scFv-IgGFc-CD28-ζ及CD20scFV-IgGFc T淋巴细胞的建立及其对B细胞淋巴瘤靶向杀伤作用的比较

摘要

目的:研究CD20scFv嵌合T淋巴细胞靶向杀伤Daudi细胞时杀伤的效果和T细胞活化情况.方法:将两种质粒转染至PA317细胞中,用转染成功的PA317上清液感染外周血T淋巴细胞后经800 mg/L的G418筛选1周后去杀伤Daudi、K562细胞,分别在不同时点用流式细胞仪检测Daudi细胞AnnexinV的阳性率,用ELISA检测细胞因子IL-2、IFNγ.结果:Daudi细胞Annexin V的阳性率在24 h内两实验组与K562组相比明显增高,而实验组之间没有显著差异.72 h时CD20scFv-IgGFc-CD28-ζ组比CD20seFv-IgGFc组IL-2(1 509.00 ng/L比220.54 ng/L)和IFNγ(912.16 ng/L比251.42 ng/L)的分泌量有显著增高.结论:①两种CD20scFv特异的T细胞在引起Daudi细胞早期凋亡无显著差异,说明在CD20scFv的靶向杀伤过程中CD28-ζ基因可能不主导Daudi细胞的早期凋亡.②CD20scFv-IgGFc-CD28-ζ组IL-2、IFNγ增幅更加明显,说明CD3ζ和CD28嵌合的T细胞可以自身活化而不受MHC的限制,从而增强了T细胞的活化和杀伤等功能.