胚胎组织提取液影响表皮干细胞表型变化的初步研究

摘要

目的:模拟表皮于细胞周围生态微环境,研究表皮干细胞在此环境中的表型变化,表皮干细胞微环境在表皮干细胞"命运"决定过程中的作用.方法:分离、培养表皮干细胞,观察其形态,并进行免疫组织化学鉴定及免疫荧光检测.制备小鼠胚胎组织匀浆液,荧光活细胞示踪法和逆转录聚合酶链式反应检测胚胎组织提取液对表皮干细胞表型变化的影响.结果:原代分离培养的表皮基底层干细胞表达α6、β1整合素、K19、K14、p63、Nestin、PCNA为阳性,而K10不表达.激光共聚焦检测显示α6整合素和CD71在表皮干细胞中的分布存在着区域性差异.此外,流式细胞检测显示胚胎组织提取液作用后α6+ CD71-表达细胞由细胞总数的22.49%减少至10.92%,而α6+ CD71+、α6-CD71+表达细胞则分别由诱导前的62.29%及0.19%增加至诱导后的68.34%及4.51%.RT-PCR结果表明胚胎组织提取液作用后,表皮干细胞中β1整合素、K19、K10表达增强,而K14表达减弱.结论:IV型胶原黏附法分离的表皮干细胞具有干细胞的特点.α6整合素、CD71在表皮干细胞中分布的区域差异及CD71表达位点的空间变化可以作为区分表皮干细胞及其子代细胞标志之一.胚胎组织提取液对表皮干细胞的增殖分化具有促进作用.胚胎组织提取液中的某些因子可能抑制了K14表达的TA细胞的终末分化,甚至诱导其发生逆向分化,导致诱导后K14的总体表达水平下调.