RUNX3小干扰RNA对SH-SY5Y细胞生长和药物敏感性的作用

摘要

目的:探讨RUNX3基因对人神经母细胞瘤细胞生长和药物敏感性的调节作用.方法:构建RUNX3基因的小干扰RNA载体并将其转导入SH-SY5Y细胞,G418筛选后获得稳定转染的阳性克隆后,应用RT-PCR和Western blotitng进行鉴定;MTT法和流式细胞仪检测细胞转染前后生长速度和细胞周期的变化;MTT法和流式细胞仪检测细胞转染前后对阿霉素敏感性的变化;Western blotting检测细胞转染前后细胞周期相关蛋白cyclin D1、CDK4、CDK6、p21、p27和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax以及耐药相关蛋白P-gp、MRP的表达变化.结果:成功构建了RUNX3的小干扰RNA载体并将其转染SH-SY5Y细胞;筛选到稳定的RUNX3低表达的神经母细胞瘤细胞模型;MTT和流式细胞仪检测结果显示,转染RUNX3小干扰RNA后的细胞的生长速度显著快于对照组(P＜0.05),且G1期的细胞比率显著低于对照组(P＜0.05);MTT法和流式细胞仪结果显示,转染RUNX3小干扰RNA后的细胞对化疗药物的敏感性降低,细胞内的阿霉素蓄积量显著减少(P＜0.05);Western blotting显示,转染RUNX3小干扰RNA后的细胞中Bcl-2、P-gp和cyclin D1的表达明显增高,p21的表达明显降低.结论:下调RUNX3基因能促进神经母细胞瘤细胞生长,降低细胞对化疗药物的敏感性,提示RUNX3在神经母细胞瘤的发生和发展中可能扮演重要角色.