TSG101小干扰RNA对SH-SY5Y细胞生长和药物敏感性的作用

摘要

目的:探讨TSG101基因对人神经母细胞瘤细胞生长和药物敏感性的调节作用.方法:构建TSG101基因的小干扰RNA载体并将其转导入SH-SY5Y细胞,G418筛选后获得稳定转染的阳性克隆后,应用RT-PCR和Western blotting进行鉴定;MTT法和流式细胞仪检测细胞转染前后生长速度和细胞周期的变化;DNA ladder法和流式细胞仪检测细胞转染前后对顺铂诱导的凋亡的变化;Western blotting检测细胞转染前后凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax,耐药相关蛋白P-gp、MRP的表达变化.结果:成功构建了TSG101的小干扰RNA载体并将其转染SH-SY5Y细胞;筛选到稳定的TSG101低表达的神经母细胞瘤细胞模型;MTT和流式细胞仪检测结果显示,转染TSG101小干扰RNA后的细胞的生长速度显著减慢于对照组(P＜0.05),且G1期的细胞比率显著高于对照组(P＜0.05);DNA ladder法和流式细胞仪检测结果显示,用10 mg/L CDDP处理36 h后,转染TSG101小干扰RNA后的细胞的凋亡数显著多于对照组(P＜0.05),形成DNA条带;Western blotting显示,转染TSG101小干扰RNA后的细胞中Bcl-2和P-gp的表达明显低于对照组.结论:下调TSG101基因能抑制神经母细胞瘤细胞生长,增加细胞对化疗药物的敏感性,提示TSG101在基因治疗中具有较好的临床应用前景.