人肿瘤转移抑制基因TMSG-1单克隆抗体的制备、鉴定及在肿瘤检测中的应用

摘要

目的明确人肿瘤转移抑制基因TMSG-1蛋白分子量大小和细胞定位,制备和鉴定TMSG-1单克隆抗体,并探讨其在临床肿瘤标本检测的价值.方法采用多肽固相合成法(Fmoc法)合成15肽TMSG-1抗原片段,并与匙孔槭血蓝蛋白(mcKLH)偶联,免疫BAL B/C小鼠,采用细胞融合、ELISA法检测和快速有限稀释法筛选和制备单克隆抗体,并应用Western印迹和免疫组织化学ABC法染色进行抗体鉴定和肿瘤检测.结果筛选出抗TMSG-1抗体的单克隆杂交瘤细胞系C8,免疫球蛋白亚类测定为IgM.半抗原竞争抑制实验证实该抗体是特异的抗TMSG-1抗体.Western印迹显示不转移癌细胞亚系2B4和LH7有明显的相对分子质量为45 000蛋白条带,而高转移亚系1E8和BE1则条带很弱.细胞免疫组织化学染色显示2B4和LH7强阳性,为细胞膜和细胞质着色;而1E8和BE1则为阴性.石蜡切片ABC法检测52例乳腺癌和41例结肠癌组织中TMSG-1蛋白表达发现:未转移的癌组织多为中度阳性或强阳性,中度以上阳性率分别为36%(乳腺癌)和52.4%(结肠癌);而转移的癌组织多为弱阳性或阴性, 中度以上阳性率分别为7.4%(乳腺癌)和35%(结肠癌),统计学分析表明TMSG-1在未转移癌组织中的表达显著高于转移性癌组织(P<0.05).结论成功制备了抗人肿瘤转移抑制基因TMSG-1单克隆抗体,能应用于Western印迹和免疫组织化学以检测癌细胞和癌组织中TMSG-1蛋白的表达.并证实:(1)TMSG-1蛋白相对分子质量为45 000,支持编码380个氨基酸;(2)TMSG-1蛋白定位于癌细胞的细胞膜和细胞质;(3)TMSG-1蛋白的表达与肿瘤转移潜能明显负相关,提示TMSG-1基因是一个新的肿瘤转移抑制基因.