干扰SEDL基因表达对软骨细胞生理活性的影响

摘要

目的 初步研究干扰SEDL基因表达后对人软骨细胞中Ⅱ型胶原蛋白表达水平、内质网位置分布及超微结构和软骨细胞活性的影响.方法 将靶向干扰SEDL基因的病毒转染入人软骨细胞中,QPCR及Western Blot分别检测SEDL基因及Sedlin蛋白表达水平,评价干扰SEDL基因的软骨细胞模型是否建立成功;免疫荧光及Western Blot检测Ⅱ型胶原蛋白表达情况,荧光探针检测内质网位置分布改变,电镜检测内质网超微结构改变,MTT法检测软骨细胞增殖活性情况.结果 (1)转染干扰SEDL基因病毒的软骨细胞SEDL基因表达明显降低,具有统计学差异(P＜0.05).Sedlin蛋白表达降低,表明干扰SEDL基因的细胞模型构建成功.(2)随着Sedlin蛋白的减少,Ⅱ型胶原蛋白表达量降低,具有统计学差异(P＜0.05).(3)细胞模型中内质网分布发生改变,其形态变圆,触角变少,颜色变淡,细胞与细胞间内质网荧光排列不规则,紊乱.(4)电镜下观察,细胞模型中内质网超微结构出现水肿扩张.(5)转染干扰SEDL基因病毒的软骨细胞活性在48 h达峰,之后细胞活性下降,且具有统计学差异(P＜0.05).结论 Sedlin降低影响软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白表达,软骨细胞中内质网形态位置分布及超微结构发生改变,致使软骨细胞活性降低.