巴戟天-牛膝醇提物对SD大鼠软骨细胞G1/s周期蛋白与基因表达影响的实验研究

摘要

目的：探究巴戟天-牛膝醇提物(M-AAE)对体外培养的SD大鼠软骨细胞G1/s周期蛋白与mRNA含量表达的影响,为其防治骨关节炎的临床应用提供依据. 方法：①用乙醇加热回流法获得其醇提物成分;采用机械-酶消化法分离SD大鼠膝关节处的关节软骨,建立体外培养细胞模型并进行鉴定;②MTT法检测M-AAE对软骨细胞增殖特性的影响,使用倒置相差显微镜镜下观察软骨细胞状态;③PCR、Western Blot法分别检测体外培养大鼠软骨细胞经M-AAE的0,75,150,300μg·mL-1DMEM溶液干预48h后的mRNA、蛋白含量的表达. 结果：①软骨细胞经Ⅱ型胶原法染色后,阳性对照组胞浆区域浸染为棕黄色;②经MTT检测M-AAE对软骨细胞增殖具有一定的时效-量效关系,其最佳干预时间和浓度分别为48h和150μg·mL1;③M-AAE干预软骨细胞后,各加药组细胞周期蛋白依赖性激酶-4(Cyclin-dependent kinase,CDK4)、细胞周期蛋白D1(Cyclin,Cyclin D1)的mRNA与蛋白含量的表达量均明显高于0μg·mL-1组,其中以150μg·mL-1组的表达量最高(P＜0.01),75μg·mL-1组和300μg·mL-1组在CDK4及CyclinD1mRNA上比较,其表达量差异无统计学意义(P＞0.05). 结论：巴戟天-牛膝醇提物可上调CDK4、CyclinDl mRNA及蛋白表达,对SD大鼠软骨细胞具有一定的促增殖作用.