绿色荧光蛋白标记的视网膜母细胞瘤原位移植瘤模型

摘要

目的应用绿色荧光蛋白(GFP)基因标记人类视网膜母细胞瘤(RB)细胞,建立新型裸鼠原位移植瘤模型,探讨RB的生长和转移特征.方法利用脂质体将GFP真核表达质粒pEGFP-N1转入人类RB细胞(HXO-RB44),新霉素、荧光显微镜及流式细胞仪筛选稳定表达GFP的细胞克隆.30(60只眼)裸鼠每只眼视网膜下腔均注入2 μl细胞密度为(4.5～5.5)×108个细胞/ml的RB细胞悬液.术后利用带荧光的体视镜连续观察肿瘤生长情况,于不同时间点处死动物,荧光显微镜观察视神经、颅底、肺、肝、肾的肿瘤转移情况.结果术后34～37 d可观察到肿瘤生长至眼外,并可观察到肿瘤沿视神经向颅内转移,肿瘤细胞沿视神经鞘、睫状后长动脉浸润生长;移植瘤病理组织学表现类似于人类RB肿瘤;免疫组化染色肿瘤细胞GFP呈阳性表达.结论经GFP基因标记的人类RB细胞裸鼠视网膜下腔移植建立的RB移植瘤模型,为研究自然状态下RB肿瘤的生长和转移提供了新的工具.(中华眼科杂志,2004,40:225-228)