RNA干扰技术体外抑制低氧诱导因子-1α及血管内皮细胞生长因子表达的研究

摘要

目的 研究正常氧及低氧环境下,pSUPERH1-siHIF-1α真核表达载体对低氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的抑制效果及由此引起的血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达的差异.方法 构建pSUPERH1-siHIF-1α真核表达载体,并建立pSUPERH1-siHIF-1α稳定转染细胞系.采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法,筛选HIF-1α mRNA抑制效率最高的细胞系.然后将其与对照细胞在正常氧(20%O2)及低氧环境(1%O2)下培养,采用半定量RT-PCR、免疫印迹法及ELISA技术检测正常氧及低氧环境下pSUPERH1-siHIF-1α对HIF-1α及VEGF表达的抑制效果.结果 低氧环境下,pSUPERH1-siHIF-1α可明显抑制HIF-1α和VEGF mRNA及蛋白质的表达.而正常氧环境下,pSUPERH1-siHIF-1α虽可明显下调HIF-1α mRNA表达水平,但对VEGF mRNA和分泌型蛋白表达水平无明显抑制效果.结论 低氧环境下,pSUPERH1-siHIF-1α能显著抑制HIF-1α的表达,且下调其下游基因VEGF的表达.因此,pSUPERH1-siHIF-1α可能为视网膜新生血管的基因治疗提供新的途径.