EGCG干预LMP1激活的AP-1信号转导通路

摘要

目的探讨EGCG对鼻咽癌细胞激活蛋白1(AP-1)信号转导通路的干预作用,阐明在鼻咽癌细胞中茶多酚干预EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)活化的AP-1信号转导通路中靶分子的机制.方法采用EB病毒阴性及阳性的鼻咽癌细胞系CNE1和CNE1-LMP1细胞.利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察EGCG对CNE1和CNE1-LMP1细胞的生存率的影响.采用瞬间转染及报道基因法观察EGCG对AP-1活性的作用.利用间接免疫荧光法观察EGCG对JNK核移位的影响,再分别提取CNE1和CNE1-LMP1的胞浆及胞核蛋白,Western blot分析EGCG抑制JNK的核移位后,胞浆及胞核蛋白中JNK的变化.采用Western blot分析EGCG对c-Jun的磷酸化水平的影响.采用瞬间转染及报道基因法观察EGCG对cyclinD1启动子活性的影响,并用Western blot分析EGCG对cyclinD1蛋白表达的作用.结果 EGCG对鼻咽癌细胞的抑制作用有剂量依赖性,并可抑制AP-1的活性.EGCG能抑制JNK的核移位,并抑制c-Jun的磷酸化.EGCG对AP-1信号通路下游的靶基因cyclinD1的启动子活性及其蛋白表达都有抑制作用.结论 EGCG对信号转导通路上的AP-1、JNK、c-Jun、cyclinD1多个靶点分子具有干预作用.LMP1是EB病毒这种编码的蛋白,因此,EGCG抑制与病毒相联系的信号转导通路,可能是EGCG抑制与病毒相关的肿瘤的分子机制之一.