高效阴离子色谱结合脉冲安培检测器分析单抗N糖谱的方法学联合验证

摘要

目的:对高效阴离子色谱结合脉冲安培检测器(high performance anion exchange chromatography with pulsed amperometric detection,HPAEC-PAD)方法检测单抗N糖谱进行多家实验室的联合验证.方法:依据ICH_ Q2_R1指导原则和《中华人民共和国药典》2015年版通则9101,开展方法学验证.评价指标包括:特异性、线性、准确性、精密性、定量限、范围和耐用性.结果:验证数据表明,该方法具有良好的特异性、准确性、精密性和耐用性.在200～ 800 μg蛋白范围内具有良好的线性,r2＞0.96,且回收率在80％～120％范围内.精密性评价结果显示,该方法整体的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)＜10％.该方法的定量限为0.082％,可对在0.082％～79.082％比例范围内的单个色谱峰进行准确定量分析.同时多个条件下的耐用性评价结果表明该方法具有耐用性,峰面积百分比RSD＜ 10％,保留时间RSD ＜6％.结论:组织开展了基于HPAEC-PAD的检测单抗N糖谱的方法学联合验证,为《中华人民共和国药典》标准提高提供方法学验证依据.