流式细胞术检测体外微核方法的验证

摘要

目的:采用不同作用强度、不同作用机制的遗传毒性化合物及非遗传毒性化合物验证已建立的96孔板流式细胞术体外微核自动化检测方法.方法:试验分为+S9短时处理组(4 h)和-S9持续处理组(24 h),加样后24 h(5-氟尿嘧啶为48 h)收获细胞.验证的化合物分别选择3个不同浓度处理CHO-K1细胞,设置环磷酰胺(+S9组)或丝裂霉素C(-S9组)的阳性对照和溶剂对照.采用EMA和SYTOX green双色标记,流式细胞仪分析96孔板的微核率,并与常规平皿培养、人工阅片的细胞分裂阻滞法的双核微核结果进行比较.结果:人工阅片和流式细胞术检测验证化合物诱导CHO-K1细胞微核的结果一致.在有或无S9处理条件下,甲基磺酸甲酯、秋水仙素、依托泊苷和4-硝基喹啉-1-氧化物体外微核试验结果均为阳性;5-氟尿嘧啶和己烯雌酚仅在无代谢活化系统条件下,试验结果为阳性;苯并芘仅在代谢活化系统的情况下,试验结果为阳性;氯化钠、蔗糖和2-氨基蒽体外微核试验结果为阴性.结论:本试验进一步证实流式体外微核检测方法灵敏度高、特异性好,可代替人工阅片的双核微核方法,用于化合物遗传毒性早期筛选和遗传毒性评价.