人源抗BLyS单链抗体的筛选及其构建与表达

摘要

目的:从人源单链抗体库中筛选抗B细胞刺激因子(BLyS)的单链抗体基因、构建表达载体并实现单链抗体的表达.方法:以哺乳动物细胞展示型人源ScFv抗体库为起始文库,通过流式细胞术进行分选,获得荧光强度最强、比例为0.1％的阳性细胞.从候选细胞中提取质粒并转化至DH5α中进行扩增,得到质粒转染293T细胞作为下一轮筛选所需的抗体库.经过依次降低抗原浓度进行了3轮分选得到2个候选的ScFv序列.经序列分析,选择其中一种单链抗体基因,利用基因工程技术构建分泌型表达质粒,转染293E细胞并通过镍亲和层析纯化获得B-10 ScFv抗体蛋白并通过FortieBio Octet QK进行亲和力分析.结果:经过3轮筛选获得了全新的抗BLyS ScFv抗体序列,成功构建并表达了anti-BlyS ScFv抗体蛋白,该单链抗体与的BLyS亲和常数为3.08 nmol·L-1.结论:从哺乳动物细胞展示型人源ScFv抗体库中成功获得了可结合BLyS的全新单链抗体基因序列,该单链抗体与BLyS具有较高的亲和力,这为后续的活性研究以及产品开发奠定了基础.