胞嘧啶脱氨酶自杀基因转染SHG-44胶质瘤细胞的实验表达研究

摘要

目的 以含胞嘧啶脱氨酶(CD)基因的重组表达质粒(recombinant plasmid vector)pCMVCD转染SHG-44胶质瘤细胞,建立胶质瘤嘧啶脱氨酶/5-氟胞嘧啶(CD/5-FC)自杀基因治疗系统.方法 体外扩增、酶切鉴定pCMVCD质粒并采用DNA序列测定pCMVCD质粒中的CD基因;改良Eagle培养基(DMEM)培养SHG-44胶质瘤细胞;脂质体lipofectamine2000介导pCMVCD质粒转染SHG-44细胞,G418筛选重组子;免疫细胞化学检测表达情况.结果 测序证实PCMVCD质粒含有CD基因;脂质体成功介导pCMVCD质粒转染SHG-44细胞,获取了抗性细胞克隆(定名SHG-44/CD细胞);免疫细胞化学染色显示SHG-44/CD细胞成功地表达了CD.结论 脂质体介导pCMVCD质粒转染SHG-44细胞的方法简单、高效;成功建立了胶质瘤CD/5-FC自杀基因治疗系统,为后续实验研究打下了基础.