人参皂甙Rd对EAE模型小鼠Tregs/Th17细胞失衡的调节作用研究

摘要

目的 探讨人参皂甙Rd对实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）模型小鼠调节性T细胞（Tregs）/辅助性T细胞17（Th17）失衡的影响。方法 将54只6～8周龄雌性C57BL/6小鼠按随机数字表法分为人参皂甙Rd组、磷酸盐缓冲液（PBS）组、空白对照组,每组18只。前2组采用经典的髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55（Mog35-55）肽段免疫诱导方法制备成EAE模型,并在接种免疫后第13天起将人参皂甙Rd 40 mg/（kg·d）溶解于PBS中腹腔注射入人参皂甙Rd组（1次/d）,PBS组和空白对照组予同等剂量PBS腹腔注射。各组小鼠于接种免疫后第1～20天每天进行临床症状评分,并于评分结束当天取小鼠腰髓进行组织病理学评估（炎症评分及脱髓鞘评分）。在接种免疫后第20天,取各组小鼠脾脏,行体外脾细胞培养48 h后取上清液,采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测白介素-10（IL-10）、白介素-17（IL-17）水平；采用流式细胞仪检测脾组织中Tregs细胞、Th17细胞的比例；取各组小鼠腰髓,采用实时荧光定量PCR检测腰髓中Janus激酶1（JAK1）、Janus激酶2（JAK2）、信号转导与转录激活因子3（STAT3）、维甲酸相关孤核受体γt（ROR-γt）、叉头型基因p3（Foxp3） mRNA的表达水平。结果 （1）人参皂甙Rd组的临床症状评分、炎症评分均明显低于PBS组,差异均有统计学意义（P＆0.05）。PBS组腰髓中有大量炎性细胞浸润及大片髓鞘脱失,而人参皂甙Rd组的髓鞘脱失较PBS组明显减少,2组间脱髓鞘评分比较差异有统计学意义（P＆0.05）。（2）与PBS组相比,人参皂甙Rd组脾细胞培养上清液中IL-10水平明显升高,IL-17水平明显降低,差异均有统计学意义（P＆ 0.05）。（3）与PBS组相比,人参皂甙Rd组脾组织中CD4+IL-17+细胞比例明显降低,CD4+CD25+Foxp3+细胞比例明显升高,差异均有统计学意义（P＆0.05）。（4）与PBS组相比,人参皂甙Rd组腰髓中JAK1、JAK2、STAT3、ROR-γt mRNA的表达水平明显降低,Foxp3 mRNA的表达水平明显升高,差异均有统计学意义（P＆0.05）。结论 人参皂甙Rd可通过改变与Tregs/Th17细胞分化相关的Foxp3/RORγt/STAT3信号通路分子的表达,升高IL-10水平和Tregs细胞比例,降低IL-17水平和Th17细胞比例,从而改善EAE模型小鼠的临床症状。