反义及显性负调节AKT2抑制胶质瘤侵袭和迁移的实验研究

摘要

背景与目的:近来的研究显示AKT激酶家族成员在调节细胞生长、增殖、存活和代谢等方面的信号传导系统中起着极为重要的作用.本文以AKT2为对象,研究反义AKT2cDNA(antisenseAKT2,AS-AKT2)和显性负调节AKT2(dominantnegativeAKT2,DN-AKT2)cDNA构建体调控恶性胶质瘤侵袭性生长的作用及其机制.方法:利用反义AKT2cDNA和显性负调节AKT2cDNA构建体转染鼠脑胶质瘤细胞系C6,分别在RNA水平和蛋白水平阻断AKT2通路,将野生型和转染pLXSN空载体的C6细胞作为对照.原位杂交和蛋白印迹鉴定后,Transwell和球体培养法分析侵袭能力,球体培养和划痕实验研究细胞迁移能力,明胶酶谱分析转染前后MMP2/9酶活性变化.结果:原位杂交和蛋白印迹结果表明,C6胶质瘤细胞系在mRNA和蛋白水平均高表达AKT2;转染AS-AKT2后AKT2表达被显著抑制,但转染DN-AKT2后AKT2表达无明显变化.C6细胞转染AKT2构建体后应用体外侵袭和迁移的实验量化分析这种效应后发现:利用Matrigel夹心法和Transwell方法研究发现,C6细胞转染AKT2构建体后侵袭能力下降46%～57%,细胞迁移能力下降23%～42%.明胶酶谱分析发现MMP2/9和pro-MMP9的活性被明显抑制.结论:AKT2可以通过调节MMP2/9活性调控恶性胶质瘤侵袭性生长,因此AKT2可能成为抑制胶质瘤侵袭性生长的新靶标.