转导hTERT基因致人骨髓基质细胞永生化及向神经元样细胞诱导分化的研究

摘要

目的建立永生化的人骨髓基质细胞(hMSC)系,以供神经外科临床和基础研究使用.方法原代培养人骨髓基质细胞,采用含有人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的逆转录病毒载体上清感染hMSC,经筛选得到阳性克隆,在体外进行连续培养.应用PCR、逆转录PCR(RT-PCR)和免疫细胞化学方法检测hTERT基因的整合及表达情况,并用10%β-巯基乙醇(β-ME)、反式维甲酸(RA)、Forskolin和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对转化后的hMSC-hTERT细胞进行诱导,使其向神经元样细胞分化.结果外源性hTERT基因在DNA、RNA和蛋白质水平均有表达,诱导后的hMSC-hTERT细胞表达神经元特异性标志物神经核蛋白(NeuN)和βⅢ微管蛋白(Tubulin-βⅢ).hMSC-hTERT细胞至今已传至82代.结论外源hTERT基因在hMSC细胞中稳定整合并表达,永生化的hMSC细胞系成功建立:在一定诱导条件下,永生化的hMSC细胞能够在体外分化成神经元样细胞.