刺五加注射液体外诱导骨髓基质细胞分化为神经元样细胞的机制研究

摘要

目的:研究核因子-κB(NF-κB)在刺五加诱导骨髓基质细胞(MSCs)分化为神经元样细胞中的作用。方法:试验分对照组和刺五加诱导组。采用倒置显微镜观察细胞形态;免疫荧光检测MSCs表型、诱导后神经细胞标记蛋白表达和NF-κB亚基p65核移位情况;Western blot法检测诱导组、对照组IκBα的表达。结果:刺五加诱导1 h,可见部分细胞体积缩小,立体感增强,胞体收缩成锥形或球形;诱导5 h,较多细胞成三角形或球形,细胞微丝收缩,伪足形成细长突起,局部交织成网,部分细胞脱落、死亡。诱导7 d,多数细胞成锥形、三角形、球形,交织成网,形成较典型的神经元样细胞。对照组5 h时细胞无明显形态变化,7 d时偶见锥形细胞。免疫荧光检测到诱导组诱导1 h时nestin表达即为强阳性,到第7天仍为阳性,而β-ⅢTubulin在第1小时为弱阳性,3,5 h则为强阳性,并持续到7 d仍为阳性。神经细胞特异性烯醇化酶(NSE)在第3小时为弱阳性,第5,7天则为强阳性,未见胶质细胞标记蛋白GAFP的表达;对照组各标记蛋白表达均为阴性或可疑或弱阳性。对照组出现p65由胞浆向胞核移位,而诱导组p65信号主要仍在胞浆中表达。Western blot发现诱导前IκBα蛋白相对IA为1.0,诱导后刺五加组IκBα蛋白相对IA为0.455 6±0.100 8,较诱导前明显下降(P<0.01)。诱导后对照组IκBα蛋白相对IA为0.029 6±0.009 9,较诱导前及诱导组明显下降(P<0.01)。结论:刺五加可诱导MSCs分化为神经元样细胞。在此过程中,刺五加可以抑制NF-κB的活化。