应用Luminex xMAP液相芯片技术研究miRNAs对THP-1细胞产生细胞因子的影响

摘要

目的研究let-7e单独作用或miR-106b和miR-20a共同作用对THP-1细胞产生细胞因子的影响。方法用Cy3标记的miRNA阴性对照瞬转THP-1细胞24 h、36 h和48 h, 免疫荧光法检测其转染效率;let-7e、miR-106b及miR-20a mimic分别瞬转THP-1细胞24 h、36 h和48 h, qRT-PCR检测各miRNA表达量并筛选各miRNA的最佳转染时间;1 mg/L LPS刺激各miRNA转染的THP-1细胞1 h后, Luminex xMAP液相芯片技术检测THP-1细胞产生的IL-8、干扰素诱导蛋白-10（IP-10）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、IL-1α、IL-6、IL-10、TNF-α、IFN-α和IFN-β, 并进行差异性分析。结果转染后90%以上的THP-1细胞带有红色荧光;let-7e mimic的最佳转染时间是48 h, miR-106b及miR-20a mimic的最佳转染时间是24 h;相对于各自的对照组, let-7e mimic组IL-8、IP-10和MCP-1表达量增加, 而在miR-106b和miR-20a mimic共转染组各趋化因子表达量减少。结论 let-7e促进THP-1细胞中IL-8、IP-10和MCP-1的表达, miR-106b和miR-20a共同抑制它们的表达。