人神经元特异性烯醇化酶基因克隆及单克隆抗体的制备与鉴定

摘要

目的研究建立克隆人神经元特异性烯醇化酶(NSE)基因制备鼠抗人NSE单克隆抗体方法.方法用NSE特异引物,通过逆转录多聚酶链式反应从人肺癌细胞株A549中扩增NSE基因,构建重组质粒pGEM-T-NSE,并测序鉴定NSE基因序列.再将NSE基因定向克隆于原核高效表达载体pMS-31b,当表达MS2-NSE融合蛋白后,免疫BALB/C小鼠.并用常规杂交瘤技术,制备鼠抗人NSE单克隆抗体(NSE McAb).最后,采用免疫细胞化学(ICC)技术检测NSE在肿瘤细胞株中的表达.结果克隆岀全长1 305 bp的NSE基因,其表达的MS2-NSE融合蛋白为57 000,表达量1.42 mg/L.获得2株能稳定分泌抗NSE单克隆抗体的杂交瘤细胞株,经检测其分泌抗体的亚型分别为IgG1和IgG2a. ICC检测证明所得NSE McAb能检测到肿瘤细胞中NSE的表达.结论成功克隆了NSE基因, 并获得鼠抗人NSE McAb,为深入研究NSE基因的表达提供了有力的工具.