人BLyS基因克隆、表达和抗人BLyS单克隆抗体的制备

摘要

[目的]研制抗人BLyS单克隆抗体,以进一步探讨人BLyS与自身免疫性疾病的关系.[方法]将人BLyS基因克隆到融合蛋白原核表达载体pGEX-4T-1中,构建重组质粒pGEX-4T-1/hBLyS,用此重组质粒转化大肠杆菌BL21,加IPTG诱导大肠杆菌表达GST-hBLyS融合蛋白,用此融合蛋白免疫BALB/c鼠,取鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,用ELISA法筛选阳性克隆,用免疫印迹和流式细胞仪进一步鉴定抗体的特异性.[结果]重组质粒双酶切结果和DNA序列测定以及表达蛋白SDS-PAGE电泳结果表明,pGEX-4T-1/hBLyS重组质粒可以正确表达GST-hBLyS融合蛋白;ELISA、免疫印迹和流式细胞仪检测结果表明,1c6杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体可以特异性结合人T淋巴细胞膜表面BLyS的膜外区,属于IgG2b亚类.[结论]所获得的单克隆抗体具有能够结合人T淋巴细胞上的BLyS特异性,可用于研究人BLyS与自身免疫性疾病的关系.