携带人肝癌细胞CDK2基因的rAAV载体的构建与鉴定

摘要

目的 构建携带人肝癌细胞CDK2基因的重组腺相关病毒(rAAV)载体;方法 设计能表达CDK2特异性的小干扰RNA(siRNA),构建pAKD-shRNA-CDK2重组质粒,采用磷酸钙共转染法将重组质粒pAKD-shRNA-CDK2、包装质粒pAAV-RC和辅助质粒pHelper共转染AAV-293细胞,采用定量PCR方法对病毒进行滴度测定;结果 三质粒共转染AAV-293细胞48 h后,荧光显微镜下检测到GFP绿色荧光,表明共转染成功,测定病毒平均滴度为3.56×1012 v.g/ml.结论 成功构建携带人肝癌细胞CDK2基因的重组腺相关病毒rAAV-shRNA-CDK2.