血型A抗原的模拟多肽的表达及功能研究

摘要

目的 融合表达血型A抗原的模拟多肽,初步鉴定融合蛋白结合抗A抗体的能力.方法 PCR克隆扩增血型A抗原模拟多肽(P5)和谷胱苷肽S转移酶(GST)编码基因,并连接成P5-GST.双酶切后克隆入原核表达质粒pET28b,经E.coli DH5a扩增后纯化并酶切、测序鉴定.以BL21(DE3)为表达菌,在IPTG诱导下表达P5-GST融合蛋白.Ni-NTA柱纯化蛋白.红细胞凝集抑制实验分析融合蛋白模拟血型A抗原的能力.ABO-ELISA初步分析P5-GST融合蛋白检测血型抗体的效能.结果 成功构建P5基因和GST基因融合的原核表达质粒pET28b-P5-GST,目的基因可以高效表达,纯化的融合蛋白具有良好的模拟血型A抗原的能力.基于P5-GST融合蛋白的ABO-ELISA具有一定的检测血浆抗A抗体的能力.结论 血型A抗原的模拟多肽序列与GST的融合表达蛋白具有特异性结合抗A抗体的特性,本融合蛋白具有替代血型A多糖抗原潜能,为发展新型的抗A抗体检测方法提供依据.