荧光实时定量PCR检测线粒体DNA氧化损伤方法初探

摘要

目的 体外构建DNA氧化损伤模型,荧光实时定量PCR检测线粒体DNA氧化损伤.方法 体外应用亚甲蓝联合可见光(MBL)方法建立DNA氧化损伤模型,通过8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶(OGG1)特异性切割氧化损伤位点8-羟基鸟嘌呤(8-oxoG),运用荧光实时定量PCR法检测不同比例混匀的OGG1酶切与未酶切的DNA氧化损伤模板.结果 成功构建体外氧化损伤DNA模型,OGG1酶能特异切割氧化损伤位点;OGG1酶切DNA在定量PCR体系模板中所占比例,与线粒体DNA编码基因COⅡ扩增Ct值呈正相关.结论 自制OGG1酶具有良好的生物活性,可以联合荧光实时定量PCR检测DNA氧化损伤.