核酸薄膜技术快速检测结核分枝杆菌katG 突变的研究

摘要

目的研制一种新的核苷酸薄膜,通过导流杂交技术检测结核分枝杆菌 katG 基因突变类型,以快速判断结核分枝杆菌对异烟肼的耐受性,寻找一种快速简便检测耐异烟肼结核病的方法.方法根据结核分枝杆菌 katG基因序列设计1个野生型及2个常见突变型寡核苷酸特异探针,探针5’末端连接亚甲基(-CH2).同时设计1个人类基因组探针以及1个生物素探针.制作低密度核苷酸薄膜微阵距列,通过导流杂交技术进行杂交,将杂交结果与DNA 测序法对照.结果核酸测序显示,突变位点分别出现在包括315位点在内的7个位点,315位点突变占75.0%(18/24),最常见突变形式为 AGC315ACC 所致 Ser315Thr氨基酸改变.杂交结果与测序结果符合率为93.9%(31/33),与 DNA 测序相比,其阳性预测值、阴性预测值、敏感度、特异度分别为90.0%、100%、100%、86.7%.结论核酸薄膜导流杂交技术能快速、简便、高效地检测临床标本中有无结核分枝杆菌,并可提示结核分枝杆菌有无异烟肼耐药性,指导临床用药.