藏花素通过PI3K/Akt信号途径对阿尔茨海默病细胞模型海马神经元凋亡及P-CREB表达水平的影响

摘要

目的 研究藏花素通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号途径对阿尔茨海默病(AD)细胞模型海马神经元凋亡及磷酸化环磷酸腺苷(cAMP)反应序列结合蛋白(P-CREB)表达水平的影响.方法 原代培养大鼠海马神经元,倒置显微镜观察细胞正常生长.海马神经元被分为正常组、藏花素组,其中藏花素组细胞用Aβ25～35孵育制备成AD细胞模型,并加入不同终浓度的藏花素(0μmol、1μmol、3μmol、10μmol),正常组直接加入等体积空白溶剂.采用MTT法检测神经元存活分数,采用TUNEL染色检测海马神经元凋亡情况,蛋白质印迹法(Western Blot)检测PI3K/Akt信号途径相关蛋白(PI3K、Akt、Bcl-2和Bax)以及P-CREB表达水平,荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测PI3K/Akt信号途径相关蛋白mRNA表达水平.结果 藏花素组神经元存活分数低于正常组,凋亡细胞数高于正常组,其中经过Aβ25～35处理后,随着藏花素浓度的增加,神经元存活分数增加,凋亡细胞数降低(P<0.05).藏花素各剂量组PI3K、AKT、Bcl-2、P-CREB蛋白以及mRNA表达水平低于正常组,而Bax蛋白以及mRNA高于正常组,其中经过Aβ25～35处理后,随着藏花素浓度的增加,PI3K、Akt、Bcl-2、P-CREB蛋白以及mRNA表达水平均增加,而Bax蛋白以及mRNA表达水平降低(P<0.05).结论 藏花素可通过调控PI3K/Akt信号途径以及促进P-CREB表达,从而发挥海马神经元保护作用,抑制细胞凋亡.