磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B

摘要： 目的探讨微小RNA(miR-214)靶向磷酸酶与张力蛋白同源物(PTEN)介导磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路减轻糖尿病肾病(DN)大鼠的氧化应激和肾间质纤维化的作用和机制。方法将40只SD雄性大鼠分为对照组(control组)、模型组(DN组)、miR-214阴性对照组(DN+miR-NC组)和miR-214模拟物组(DN+miR-214 mimics组),每组10只;qRT-PCR检测各组大鼠肾组织中miR-214的表达;电子天平称量各组大鼠体质量和肾质量,计算肾指数;血糖仪测定各组大鼠的空腹血糖(FPG);双缩脲法测定各组大鼠24 h尿蛋白(UP)水平;全自动生化分析仪检测各组大鼠血清肌酐(Scr)和血清尿素氮(BUN)的水平;HE染色观察各组大鼠肾组织病理变化;Masson染色观察各组大鼠肾组织间质纤维化;ELISA检测各组大鼠血清中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的表达;免疫组织化学法检测各组大鼠肾组织中转化生长因子β1(TGF-β1)的表达;生物信息学工具预测靶基因;双荧光素酶报告基因检测基因或蛋白之间的相互作用;Western blot检测各组大鼠肾组织中PTEN、p-PI3K、p-AKT和磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)的表达。结果miR-214在DN大鼠肾组织中呈低表达,在DN+miR-214 mimics组大鼠肾组织中表达显著上调(均P<0.001);miR-214 mimics使大鼠的体质量升高,肾指数、FPG、UP、Scr及BUN水平下调(均P<0.05);DN+miR-214 mimics组大鼠肾组织中肾间质中的炎性细胞浸润减少,胶原纤维沉积减少(P<0.01);miR-214 mimics使大鼠血清中MDA的水平降低,SOD、GSH、GSH-PX的水平升高(均P<0.05),大鼠肾组织中TGF-β1的表达水平下降(P<0.05);miR-214与PTEN存在靶向关系;miR-214 mimics使大鼠肾组织中PTEN蛋白表达下调,p-PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白表达上调(均P<0.05)。结论miR-214在DN大鼠肾组织中低表达,过表达miR-214对DN大鼠的肾组织有保护作用,可能与降低肾组织的氧化应激水平、TGF-β1蛋白表达和抑制PI3K/AKT通路激活有关。

摘要： 目的 探讨白芍总苷对HaCaT细胞增殖、侵袭、迁移能力及外泌体释放的影响与可能机制。方法 采用50、100、200μg/L白芍总苷处理HaCaT细胞(分别设为低剂量组、中剂量组、高剂量组),同时设对照组(加入等量完全培养液)。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组不同时点的细胞增殖能力;采用Transwell小室实验检测细胞迁移能力、侵袭能力;培养24 h,高速离心提取外泌体,采用蛋白质印迹法(Western Blot)检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、CD63及CD81的蛋白表达量,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞中CyclinD1、Akt、p-Akt、PI3K、p-PI3K的mRNA表达量。结果 培养0、24 h时,4组细胞增殖抑制率比较,差异无统计学意义(P>0.05);培养48、72 h时,细胞增殖抑制率由高至低排列依次为高剂量组、中剂量组、低剂量组、对照组,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。迁移细胞、侵袭细胞数量由低至高排列依次为高剂量组、中剂量组、低剂量组、对照组,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。CyclinD1、CD63、CD81、Akt、p-Akt、PI3K、p-PI3K蛋白表达量和CyclinD1、Akt、p-Akt、PI3K、p-PI3K mRNA表达水平由低至高排列均依次为高剂量组、中剂量组、低剂量组、对照组,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论 白芍总苷能够抑制HaCaT细胞外泌体分泌,并抑制HaCaT细胞增殖、侵袭及迁移能力,其作用机制可能与下调PI3K/Akt信号通路有关。

摘要： 目的 探究木犀草素(Luteolin)对蛛网膜下腔出血症(SAH)大鼠磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路蛋白表达及对皮层微循环的影响。方法 将SD大鼠随机分为假手术组(Sham)、模型组(SAH)、Luteolin低(5 mg/kg)、中(25 mg/kg)、高(50 mg/kg)剂量组,尼莫地平组(0.1 mg/kg),除Sham组外,其余各组均采用二次枕大池注血法建立SAH模型;Luteolin各剂量组及尼莫地平组均经腹腔注射给予相应剂量药物,2次/d,共7 d, Sham组和SAH组给予等量生理盐水;各组大鼠末次给药12 h后,用Garcia评分法评估脑神经功能受损程度;用激光散斑血流成像系统记录脑皮层微循环情况并检测皮层微动脉血管管径及脑血流量(rCBF);苏木素-伊红(HE)染色检测大鼠脑组织损伤程度,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测脑基底组织微循环介导因子血栓素(TX)A2和5-羟色胺水平;Western印迹检测PI3K/Akt通路磷酸化蛋白(p-PI3K、p-Akt)及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白相对表达水平。结果 与Sham组相比,SAH组神经功能评分、皮层微动脉血管管径及rCBF水平、通路蛋白p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt及eNOS蛋白相对表达水平均显著降低(P0.05)。结论 Luteolin可能通过激活PI3K/Akt通路,改善微循环障碍和血管痉挛,减少脑神经元变性和死亡,改善SAH大鼠脑损伤。

摘要： 目的基于网络药理学探讨瓜蒌薤白半夏汤治疗冠心病的作用机制。方法检索中药系统药理学技术平台(TCMSP)数据库中各中药化合物,并将化合物的靶蛋白信息导入UniProt网站进行基因名转换。将整合的数据导入Cytoscape 3.5.1软件,构建“中药-化合物-靶点”可视化网络图。登录DisGeNET、GeneCards、DrugBank、OMIM、GAD、TTD数据库对冠心病基因靶点进行检索,并将疾病与药物的交集靶点录入STRING网站构建蛋白-蛋白互作(PPI)网络,对节点信息进行分析与计算后筛选得到核心靶点。将靶点基因导入Metascape网站进行基因本体(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,同时对通路进行预测。运用AutoDock 4.2、PyMOL 2.3.2软件对核心靶点进行分子对接验证。结果共筛选出瓜蒌薤白半夏汤包含的32种化合物,度值较高的是β-谷甾醇、豆甾醇、柚皮素等。通过Cytoscape 3.5.1软件构建的PPI网络包含98个节点、1318条边,核心靶点为前列腺素内过氧化物合酶2(PTGS2)、磷脂酰肌醇3-激酶催化亚基a(PIK3CA)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、血管内皮生长因子A(VEGFA)等。通过GO及KEGG富集筛选出与冠心病相关的磷脂酰肌醇3-激酶-蛋白激酶B(PI3K-Akt)等10条核心通路,并采用分子对接方法对结果进行了验证。结论柚皮素、β-谷甾醇、豆甾醇、松柏苷、槲皮素可能是瓜蒌薤白半夏汤治疗冠心病发挥关键作用的化合物,可能通过作用于PTGS2、PIK3CA、MMP2、VEGFA等靶点对肾素-血管紧张素系统(RAS)、RAS相关蛋白-A(Rap1)、血管内皮生长因子(VEGF)等通路进行调控,而PI3K-Akt可能是瓜蒌薤白半夏汤治疗冠心病的核心通路。

摘要： 目的:探讨舒芬太尼(Sufen)对肾缺血再灌注(RIRI)大鼠肾组织细胞自噬的影响及其作用机制。方法:将60只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、Sufen组、LY294002组、Sufen+LY294002组,每组12只,除对照组外,其他组均需构建RIRI模型。检测大鼠血清中肌酐(Cr)、血尿素氮(BUN)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)活性;Western blotting检测大鼠肾脏组织中微管相关蛋白1轻链3(LC3)、p62、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、PI3K、蛋白激酶B(AKT)、p-AKT蛋白表达。结果:与模型组比较,Sufen组大鼠血清中Cr、BUN水平降低,肾脏组织中的肾小管损伤减轻,肾脏组织中MDA含量、自噬小体的数量、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ降低,SOD活性、p62蛋白、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT水平升高,而LY294002组上述对应指标与Sufen组呈相反趋势(均P<0.05);与Sufen组比较,Sufen+LY294002组大鼠血清中Cr、BUN水平升高,肾脏组织中的肾小管损伤严重,肾脏组织中MDA含量、自噬小体的数量、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ升高,SOD活性、p62蛋白、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT水平降低(均P<0.05)。结论:舒芬太尼可能通过激活PI3K/AKT通路来抑制过度自噬,进而发挥对RIRI大鼠肾脏的保护作用。

摘要： 目的探究白芨多糖对心肌梗死(MI)大鼠磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)及葡萄糖调节蛋白(GRP)78信号通路蛋白表达及对心肌细胞内质网(ERS)凋亡的影响。方法SD大鼠随机分为假手术组、模型组、白芨多糖低(100 mg/kg)、中(200 mg/kg)、高(400 mg/kg)剂量组、阳性对照组(卡托普利,2.25 mg/kg),每组10只。采用冠状动脉结扎法建立大鼠MI模型,连续给药4 w,1次/d后,取心肌组织和颈动脉血,用三苯基氯化四氮唑(TTC)染色检测MI面积;苏木素-伊红(HE)染色法检测心肌病理形态;Tunel法检测心肌细胞凋亡率;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中磷酸肌酸同工酶(CK-MB)、肌钙蛋白(cTn)I水平;Western印迹检测PI3K/AKT/GRP78通路蛋白及下游蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)/真核细胞翻译起始因子(eIF)2α、促凋亡蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-12相对表达水平。结果与假手术组相比,其余各组心肌组织纤维变性、间质水肿、炎性细胞浸润等病理损伤严重,MI面积、心肌细胞凋亡率显著升高,PI3K/AKT通路蛋白表达显著降低,其介导的内质网应激凋亡GRP78/PERK/eIF2α/caspase-12通路蛋白表达显著升高(均P<0.05)。与模型组相比,白芨多糖各剂量组及阳性对照组心肌组织病理损伤减轻,MI面积、心肌细胞凋亡率显著降低,PI3K/AKT通路蛋白表达显著升高,其介导的内质网应激凋亡GRP78/PERK/eIF2α/caspase-12通路蛋白表达显著降低(P<0.05),且白芨多糖剂量越高上述指标改善效果越明显(P<0.05)。结论白芨多糖可激活PI3K/AKT通路,抑制GRP78/PERK/eIF2α信号通路蛋白表达,降低心肌细胞ERS凋亡,改善MI大鼠心肌坏死。

摘要： 乳腺癌发病率和死亡率居全球女性恶性肿瘤之首[1]。乳腺癌的发生经历“正常细胞→单纯性增生→非典型增生→原位癌→浸润性癌”的连续病变过程,癌前病变作为乳腺癌发生发展的重要阶段,干预乳腺癌前病变,阻断其向乳腺癌发展,是目前防治乳腺癌的研究关键[2]。

摘要： 目的 探讨异甘草素(ISL)对胃癌细胞顺铂(DDP)耐药的作用及其对磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(PKB)通路的调控作用。方法 胃癌细胞系SGC-7901建立DDP耐药细胞模型SGC-7901/DDP,MTT法检测细胞活力筛选出ISL、DDP合适作用浓度,检测ISL对SGC-7901/DDP顺铂敏感性的影响以及ISL与DDP联合处理协同作用。SGC-7901/DDP细胞分对照组、DDP组、ISL+DDP组、胰岛素样生长因子1(IGF-1)组(PI3K/PKB激动剂)。流式细胞术检测细胞凋亡率,划痕实验和Transwell侵袭实验检测各组细胞迁移、侵袭能力,Western Blot检测细胞PI3K/PKB通路相关蛋白表达。裸鼠移植瘤模型检测ISL与DDP对体内移植瘤生长的影响。结果 DDP和ISL均以浓度依赖方式降低SGC-7901和SGC-7901/DDP细胞的存活率,20μmol/L浓度ISL可增强DDP对SGC-7901/DDP细胞活力的抑制作用,且ISL与DDP具协同作用,10μmol/L DDP与20μmol/L ISL联合协同作用最优。与DDP组相比,ISL+DDP组胃癌细胞SGC-7901的增殖、迁移与侵袭显著降低,SGC-7901凋亡明显增加(P<0.05)。ISL+DDP组细胞p-PI3K/PI3K、p-PKB/PKB、磷酸化-雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)/mTOR的比值显著低于DDP组(P<0.05)。且IGF-1可明显减弱ISL对DDP耐药胃癌细胞SGC-7901增殖、迁移和侵袭的抑制作用。ISL与DDP联合给药能明显抑制裸鼠移植瘤的生长,而IGF-1明显逆转ISL与DDP联合给药对裸鼠移植瘤生长的抑制作用。结论 ISL可改善胃癌细胞SGC-7901对DDP耐药性,且ISL介导DDP敏感性增强可能与促进细胞凋亡及抑制PI3K/PKB通路有关。

摘要： 目的研究补骨脂素对人非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移的影响,并探讨其相关的分子机制。方法采用CCK-8法检测不同浓度补骨脂素孵育24 h后对A549细胞增殖的影响。将A549细胞分为对照组和补骨脂素低、高浓度组(8、32μg/mL),给药24 h后,通过细胞划痕试验检测细胞迁移能力,Western blotting和RT-PCR法检测磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路相关蛋白和mRNA的表达水平。结果CCK-8检测结果显示,补骨脂素(8、16、32μg/mL)对A549细胞增殖具有显著的抑制作用(P<0.05),且呈现剂量依赖趋势。与对照组比较,补骨脂素低、高浓度组细胞迁移率、p-PI3K p85、p-Akt蛋白及PI3K、Akt的mRNA水平均显著降低(P<0.05)。结论补骨脂素可抑制人非小细胞肺癌A549细胞的增殖和迁移,作用机制可能与其对PI3K/Akt通路的调控有关。

摘要： 目的探讨微小RNA(miR)-489-3p靶向第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)/磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路对膀胱癌(BC)细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法2021年1-7月于河北北方学院附属第一医院进行细胞实验,利用火山图从癌症基因组图谱(TCGA-BLCA)数据库筛选BC差异表达miRNA。以110例BC患者的癌组织及其癌旁组织和购买的人膀胱上皮永生化细胞SV-HUC-1及人BC细胞系5637、J82、T24为研究对象,采用实时荧光定量PCR测定miR-489-3p和PTEN mRNA的表达。根据miR-489-3p的相对表达量均值将BC患者分为低表达组(≤0.36)70例和高表达组(>0.36)40例,并分析miR-489-3p表达在BC患者不同临床病理特征中的变化。双荧光素酶实验验证miR-489-3p和PTEN的靶向关系。选择miR-489-3p表达最低的T24细胞进行转染实验,T24细胞随机分组为对照组、miR-NC(阴性对照)组、miR-489-3p mimics(模拟物)组、miR-489-3p mimics+pcDNA组、miR-489-3p mimics+pc-PTEN组。MTT和克隆形成实验、Transwell实验、流式细胞术分别检测细胞增殖、侵袭和凋亡;Western-blot检测PTEN、PI3K、Akt蛋白表达。结果通过火山图筛选出BC组织中显著下调的miR-489-3p。BC癌组织中miR-489-3p表达低于癌旁组织,PTEN mRNA表达高于癌旁组织(t=186.168,510.107,P均<0.001);BC细胞系miR-489-3p表达低于SV-HUC-1细胞,PTEN mRNA表达高于SV-HUC-1细胞(F=883.826,807.220,P均<0.001)。miR-489-3p低表达组患者TNM分期T_(3~4)、有淋巴结转移、肿瘤低分化比例高于高表达组(P<0.05)。双荧光素酶实验显示,miR-489-3p靶向负调控PTEN表达。miR-489-3p mimics组凋亡率及PI3K、Akt蛋白表达水平高于miR-NC组,PTEN蛋白表达水平、OD值(24 h、48 h、72 h)、克隆数目和细胞侵袭数低于miR-NC组(P均<0.01);miR-489-3p mimics+pc-PTEN组凋亡率及PI3K、Akt蛋白表达水平低于miR-489-3p mimics组,PTEN蛋白表达水平、OD值(24 h、48 h、72 h)、克隆数目和细胞侵袭数高于miR-489-3p mimics组(P<0.01)。结论miR-489-3p可能通过靶向下调PTEN表达,激活PI3K/Akt信号通路,进而抑制BC细胞增殖、侵袭,促进凋亡。

摘要： 一种用于磷脂酰肌醇蛋白激酶类及其亚类的活性快速测定的试剂盒，其特征在于该测定试剂盒有如下组成：一块由待测的磷脂酰肌醇蛋白激酶相对应的底物和磷脂预先包埋好的96孔板；酶活性测定Tris-HCl溶液；酶反应终止与洗涤HCl液以及簿层滴样用氯仿-HCl专用液所组成。

摘要： 本发明公开了棉花磷脂酰肌醇4-激酶基因(GbPI4K)、其编码蛋白以及利用该基因改良棉花品种的方法。由于磷脂酰肌醇4-激酶(PI4K)是催化磷脂酰肌醇生成细胞内重要的双信使分子三磷酸肌醇和二酯酰甘油的一个关键酶，且有证据表明GbPI4K基因在控制细胞壁发育和组织强度中起重要作用，因此本发明获得的GbPI4K基因可用于棉花遗传改良以改善棉纤维品质，具有潜在的经济效益和应用价值。

摘要： 提供具有结构式I的化合物，该化合物的各种具有本文所述的价值。药物制剂包含所述化合物或其医学上可接受的盐和药学上可接受的运载体和其他药物的组合。治疗患者的方法包括给予有这种需要的患者本发明的药物制剂。

摘要： 本发明涉及一种人的磷脂酰肌醇激酶3相关蛋白激酶突变蛋白及应用，通过将大量癌症患者作为研究病例，对病例进行基因检测并分析，确定出人的磷脂酰肌醇激酶3相关蛋白激酶的突变蛋白，根据该人的磷脂酰肌醇激酶3相关蛋白激酶的突变蛋白制备基因芯片、单克隆抗体和ELISA试剂盒，为癌症的基因诊断提供指引作用，并为相关疾病的诊断和治疗提供一定的理论基础。

摘要： 一种用于磷脂酰肌醇蛋白激酶类及其亚类的活性快速测定的试剂盒，其特征在于该测定试剂盒有如下组成：一块由待测的磷脂酰肌醇蛋白激酶相对应的底物和磷脂预先包埋好的96孔板；酶活性测定Tris－HCl溶液；酶反应终止与洗涤HCl液以及簿层滴样用氯仿－HCl专用液所组成。

摘要： 本发明公开了棉花磷脂酰肌醇4-激酶基因(GbPI4K)、其编码蛋白以及利用该基因改良棉花品种的方法。由于磷脂酰肌醇4-激酶(PI4K)是催化磷脂酰肌醇生成细胞内重要的双信使分子三磷酸肌醇和二酯酰甘油的一个关键酶，且有证据表明GbPI4K基因在控制细胞壁发育和组织强度中起重要作用，因此本发明获得的GbPI4K基因可用于棉花遗传改良以改善棉纤维品质，具有潜在的经济效益和应用价值。

摘要： 本发明涉及式(I)嘧啶衍生物、其制备方法、包含式(I)嘧啶衍生物的药物组合物及其在制备用于在温血动物例如人体内产生抗增殖作用的药物中的用途，其中p、R

摘要： 本发明涉及式(I)嘧啶衍生物、其制备方法、包含式(I)嘧啶衍生物的药物组合物及其在制备用于在温血动物例如人体内产生抗增殖作用的药物中的用途，其中Qa、G1、G2、q、R3、r、R4、X1和Qb各自具有本发明说明书中定义的任何含义。

摘要： 本发明涉及式(I)嘧啶衍生物、其制备方法、包含式(I)嘧啶衍生物的药物组合物及其在制备用于在温血动物例如人体内产生抗增殖作用的药物中的用途，其中p、R1、R2、q、R3、r、R4、X1和Q1各自具有本发明说明书中定义的任何含义。

摘要： 提供具有结构式I的化合物，该化合物的各种具有本文所述的价值。药物制剂包含所述化合物或其医学上可接受的盐和药学上可接受的运载体和其他药物的组合。治疗患者的方法包括给予有这种需要的患者本发明的药物制剂。